如何從全血中提取DNA

從血液中提取DNA的方法有很多，有最傳統(tǒng)的酚-氯仿法，也有后來改良的試劑盒方法，選擇合適的提取方法，要綜合考慮操作時間、提取效率以及性價比。我們收集了常見的全血DNA提取方法，并對它們的性能做出一個簡單的評估。

一、酚-氯仿法

1. 加入5倍紅細胞裂解液去除紅細胞，此步驟一般需要15-30分鐘；

2. 加入細胞裂解液、蛋白酶K，混勻，置于50℃水浴3小時；

3. 將消化好的液體移入1.5 ml EP管中，加入等體積飽和酚，混勻，14000 rpm離心5分鐘；

4. 吸取上清轉入另一EP管中，加入等體積的酚氯仿（飽和酚和氯仿醇1：1），混勻，14000 rpm離心5分鐘；

5. 將上清液轉入另一EP管中，加入1/10體積的NaAC(醋酸鈉)和等體積的異丙醇（或2倍體積的乙醇），混勻，置于-20℃冰箱中3小時；

6. 14000 rpm，10分鐘，棄去上清；

7. 加入1 ml 70%乙醇，溫和搖晃幾次，14000 rpm，10分鐘，棄去上清；

8. 用70%乙醇重復洗滌1次；

9. 將洗滌好的DNA置于超凈工作臺干燥10分鐘；

10. 加入50-80 μl TE或去離子水溶解沉淀DNA，置于-20℃保存。

酚-氯仿法抽提DNA的原理是通過有機溶劑抽提，去除蛋白，多糖，酚類等雜質，再加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。其優(yōu)點是不限制初始樣本量，缺點是其試劑對人體有毒害作用，且操作繁瑣，耗時很長，所以酚-氯仿法基本被現(xiàn)在的試劑盒方法取代。

二、Qiagen QIAamp DNA Blood Mini Kit法（適用于200 μl全血）

1. 在1.5 ml離心管底部加入20 μl蛋白酶k，加入200 μl全血樣本；

2. 加入200 μl的Buffer AL，旋渦震蕩15 秒；

3. 56℃水浴10分鐘；

4. 短暫離心收集離心管蓋上的液體；

5. 添加200 μl無水乙醇，旋渦震蕩15秒混勻，短暫離心收集離心管蓋上的液體；

6. 過吸附柱，8000 rpm離心1分鐘，棄濾液；

7. 加入500 μl Buffer AW1，8000 rpm離心1分鐘，棄濾液；

8. 加入500 μl Buffer AW2，14000 rpm離心3分鐘，棄濾液；

9. 最高速離心1分鐘；

加入100-200 μl洗脫液，室溫靜置1分鐘，8000 rpm離心1分鐘，將DNA洗脫下來。

三、Tiangen血液基因組DNA提取試劑盒法（適用于200 μl全血，大于200 μl要加細胞裂解液）

1. 取200μl抗凝全血，加入200μl緩沖液GB和蛋白酶K，混勻，56℃水浴10分鐘；

2. 室溫放置2-5分鐘后加入350μl緩沖液BD，充分混勻；

3. 過吸附柱，12000 rpm離心30秒，棄濾液；

4. 加入500 μl緩沖液GDB，12000 rpm離心30秒，棄濾液；

5. 加入600 μl緩沖液PWB，12000 rpm離心30秒，棄濾液，重復洗滌一次；

6. 12000 rpm離2分鐘，棄廢液，吸附柱室溫靜置2分鐘；

7. 加入50-200 μl洗脫液，室溫靜置2分鐘，12000 rpm離2分鐘，將DNA洗脫下來。

四、Simgen全血DNA小量試劑盒法（適用于400 μl全血，小于400 μl按Buffer L1：抗凝全血：Buffer L2=3:4:3的體積比進行操作）

1. 取300 μl Bufer L1于1.5 ml離心管，加入400 μl抗凝全血，旋渦震蕩30秒；

2. 加入300 μl Bufer L2，旋渦震蕩30秒；

3. 13000 rpm離心2分鐘；

4. 取離心上清倒入核酸純化柱，12000 rpm離心30秒，棄濾液；

5. 加入500 μl Buffer WA洗滌一次，12000 rpm離心30秒，棄濾液；

6. 加入600 μl Buffer WB洗滌一次，12000 rpm離心30秒，棄濾液；

7. 14000 rpm離心1分鐘；

加入100-200 μl洗脫液，室溫靜置1分鐘，12000 rpm離心30秒，將DNA洗脫下來。

以下是某一檢測公司對上述三款試劑盒從操作時間、提取效率以及價格這三個性能方面做出的測評。

五、總結如下：

1. 從操作步驟的簡便性上看，Simgen試劑盒更勝一籌，實測從6個血液樣本中提取DNA耗時30分鐘；Tiangen耗時最長，70分鐘。

2. 從提取的DNA純度上看，三個廠家的產品獲得的DNA純度都在1.8左右，差別不大。

3. 從提取的DNA濃度上看，Qiagen和Tiangen提取的DNA濃度差別不大，Simgen試劑盒提取的DNA濃度最高，接近Qiagen或Tiangen的濃度一倍。當然，必須指出，Simgen一次是從400μl全血中提取的DNA量。

從產品報價上看，Qiagen產品提取一次血液中的DNA需要35.4元——實在是太貴了；Tiangen的最便宜，7.5元一次。

綜合考慮，如果用戶對提取的DNA濃度要求較高，且追求簡便快捷的操作體驗的，可以考慮選擇Simgen的產品；如果想省錢，愿意多花點時間的，可以選擇Tiangen的試劑盒；Qiagen的試劑盒屬于實驗室的奢侈品，除了品牌比較響亮，速度比Tiangen快一點外，價格和操作的簡便性都比不過Simgen的產品。