1. 組織塊解凍,取適量組織于PBS溶液中清洗干凈后放入裝有500微升PBS的離心管中(1.5ml),用剪刀剪碎;12000rpm離心8min,取出棄上清;
2. 加入0.45ml TES混勻,再加入50ul SDS(10%),20ul蛋白酶K(20mg/ml),充分混勻后,于56℃保溫4-6h,每2h搖1次,至體系透亮為好。
3. 放置到室溫,加入等體積飽和酚(500ul),上下溫柔翻轉(zhuǎn)5min,12000r/m,離心 10min,分離水相和有機(jī)相,小心吸取上層含核酸的水相,到一個(gè)新的1.5ml離心管。
4. 加入等體積酚:氯仿:異戊醇(25:24:1),上下溫柔翻轉(zhuǎn)5min,12000r/m,離心10分鐘,取上層轉(zhuǎn)移到新的1.5ml離心管中。
5. 加入等體積氯仿:異戊醇(24:1),上下溫柔翻轉(zhuǎn)5min,10000r/m,離心10分鐘,取上層清液到一個(gè)新的1.5ml離心管。
6. 加入1/10體積的NaAc(4℃保存),加入2倍體積的-20℃預(yù)冷的無水乙醇沉淀DNA,置于-20℃中保存30min或更久;觀察現(xiàn)象。
7. 12000 r/m,離心10分鐘,棄乙醇。
8. -20℃保存的75%乙醇洗滌,12000 r/m,離心5分鐘,去乙醇,55℃干燥DNA。 9. 加入適量TE溶解DNA(具體依DNA的多少而定)(一般50μL),-20℃保存?zhèn)溆谩?/span>