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動(dòng)物組織DNA提取方法

作者:新景實(shí)驗(yàn)室
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1. 組織塊解凍,取適量組織于PBS溶液中清洗干凈后放入裝有500微升PBS的離心管中(1.5ml),用剪刀剪碎;12000rpm離心8min,取出棄上清;

2. 加入0.45ml TES混勻,再加入50ul SDS10%),20ul蛋白酶K20mg/ml),充分混勻后,于56保溫4-6h,每2h1,至體系透亮為好。

3. 放置到室溫,加入等體積飽和酚(500ul),上下溫柔翻轉(zhuǎn)5min,12000r/m,離心 10min,分離水相和有機(jī)相,小心吸取上層含核酸的水相,到一個(gè)新的1.5ml離心管。

4. 加入等體積酚:氯仿:異戊醇(25241),上下溫柔翻轉(zhuǎn)5min,12000r/m,離10分鐘,取上層轉(zhuǎn)移到新的1.5ml離心管中。

5. 加入等體積氯仿:異戊醇(241),上下溫柔翻轉(zhuǎn)5min10000r/m,離心10分鐘,取上層清液到一個(gè)新的1.5ml離心管。

6. 加入1/10體積的NaAc4保存),加入2倍體積的-20預(yù)冷的無水乙醇沉淀DNA,置于-20中保存30min或更久;觀察現(xiàn)象。

7. 12000 r/m,離心10分鐘,棄乙醇。

8. -20保存的75%乙醇洗滌,12000 r/m,離心5分鐘,去乙醇,55干燥DNA。 9. 加入適量TE溶解DNA(具體依DNA的多少而定)(一般50μL),-20保存?zhèn)溆谩?/span>