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動(dòng)物組織總RNA提取方法

作者:新景實(shí)驗(yàn)室
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1、  取新鮮動(dòng)物組織0.1-0.2g置于組織勻漿器中,加入預(yù)冷的細(xì)胞裂解液1買來(lái),在水浴中迅速勻漿15-30s,以充分研碎組織。然后將細(xì)胞懸浮液吸入另一試管中。

2、  加入2mol醋酸鈉(ph4.0120μl,充分混勻。

3、  加入1.2ml酚:氯仿:異丙醇,充分混勻搖振10s,冰浴15min。

4、  將混合物轉(zhuǎn)移至1.5mlEP管中,4、離心10000r/min20min。

5、  移取上層水相至另一個(gè)EP管中,加入等體積的異丙醇,20,30min沉淀RNA

6、  4,離心12000r/min,15min

7、  棄上清液,加入70%乙醇400ul,洗滌RNA沉淀物被懸浮,則4離心10000r/min10min。

8、  棄上清液,自然干燥,但應(yīng)避免沉淀完全干燥否則RNA難以溶解。

9、  加入100 μl無(wú)RNase水重懸RNA,或加1ml無(wú)水乙醇和1/10體積3mol醋酸鈉(ph4.0),-70℃保存。