在一個(gè)陽(yáng)光明媚的早晨,小新正在忙碌的趕著寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告,抬頭發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室的師兄師妹們正在貢獻(xiàn)自已的唾液,貌似打算做一次唾液基因組DNA提取實(shí)驗(yàn)??吹酱司埃⌒滦南耄阂晃乙藏暙I(xiàn)點(diǎn),順便測(cè)測(cè)自已唾液里的DNA有多少濃度?所以馬上開(kāi)始行動(dòng)~拿著自已的唾液帶著好奇心的我走進(jìn)實(shí)驗(yàn)室,恰好看見(jiàn)師兄正拿著我們的全血DNA小量試劑盒準(zhǔn)備做實(shí)驗(yàn)。小新心里充滿疑問(wèn),問(wèn):“咋們這個(gè)試劑盒也能提唾液里的基因組DNA?”“那當(dāng)然了,全血、唾液、細(xì)胞懸浮液都可以”師兄笑著說(shuō)?!昂?,那我來(lái)做吧”因?yàn)橄肟纯词遣皇钦娴挠羞@個(gè)效果,小新決定接手了這個(gè)實(shí)驗(yàn)~
據(jù)小新所知,市場(chǎng)上從新鮮唾液里提取基因組DNA的試劑盒基本上都需要蛋白酶K的消化,而且實(shí)驗(yàn)過(guò)程需要1個(gè)半小時(shí)左右。而我現(xiàn)在利用的全血DNA小量試劑盒則無(wú)需蛋白酶K消化,15分鐘就可以完成實(shí)驗(yàn)。這無(wú)論在試劑上還是時(shí)間上都有著明顯的差距,就這樣,帶著好奇心的小新開(kāi)始做實(shí)驗(yàn)啦~
實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備
樣本:300μl新鮮唾液
全血DNA小量試劑盒(simgen Cat. No. 3001050)、無(wú)水乙醇、
設(shè)備:臺(tái)式小量離心機(jī)(可配離心1.5ml離心管和2ml離心管的轉(zhuǎn)子)、水浴鍋和旋渦振蕩器
其他耗材:1.5ml離心管、移液器吸頭(為避免樣品間的污染,建議選用含有濾芯的移液器吸頭)、一次性手套及防護(hù)用品和紙巾
差不多15分鐘后,按耐不住好奇心的小新急匆匆的拿著8支剛提好的DNA在超微量分光光度計(jì)(simgen)上測(cè)量了DNA含量和純度。我們來(lái)看看~
從圖上看到,試劑盒從8個(gè)樣提取的DNA的D260/D280值都在1.8左右,此外,小新最后buffer TE洗脫體積為80μl,從不同人的樣本中所得到的DNA為2-5μg,可能這時(shí)你們會(huì)覺(jué)得為什么提到的DNA濃度會(huì)不一樣?嘻嘻~因?yàn)椴煌娜说目谇恢械拿撀浼?xì)胞量不同,我們所提到的DNA濃度就不一樣了~由此看來(lái)用全血DNA小量試劑盒(simgen)提取唾液DNA還是能提到核酸的,但是這些核酸是不是我們所需要的基因組DNA還需驗(yàn)證,所以隨后小新又以唾液DNA為模板進(jìn)行了普通PCR。
β-球蛋白引物:(F:TTAGGCCTTAGCGGGCTTAGAC
R:CCAGGATTTTTGATGGGACACG,(產(chǎn)物長(zhǎng)度1300bp)
模板:人類基因組DNA(陽(yáng)性樣本)、隨機(jī)取兩管唾液DNA(檢測(cè)樣本1、檢測(cè)樣本2)。
反應(yīng)條件:
PCR電泳圖:
從上圖可以看出,檢測(cè)樣本1和檢測(cè)樣本2擴(kuò)出的條帶和陽(yáng)性對(duì)照是在同一位置,對(duì)照DNA Marker可看出條帶正好在1200bp偏上的位置,是我們所需的PCR產(chǎn)物的長(zhǎng)度1300bp左右,說(shuō)明小新提取的唾液DNA是人類基因組DNA。
看到最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,小新之前心里的質(zhì)疑自然而然的就消失了,原來(lái)15分鐘真的能從新鮮唾液里提取到基因組DNA(內(nèi)心有點(diǎn)小澎湃)。好啦~今天就寫到這(讓我去激動(dòng)會(huì)兒)~對(duì)了,如果有什么疑問(wèn)的話,歡迎咨詢小新哦~technical@simgen.cn ,拜~
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