Trizol試劑是基于異硫氰酸胍/酚法的一種即用型的從不同類型的樣本中提取總RNA的試劑，Trizol純化RNA既不限制樣本種類也不限制起始樣本量，是實(shí)驗(yàn)室最常用的RNA純化方法。但是用Trizol試劑純化RNA的不足之處在于需要很長(zhǎng)的離心和RNA干燥時(shí)間，并且純度通常還比過(guò)柱純化獲得的RNA來(lái)的更差。

所以在RNA純化柱隨處可得的情況下，自制Trizol柱純化試劑盒不失為提升工作效率和工作質(zhì)量的好方法。我們來(lái)看一下怎么在實(shí)驗(yàn)室自己進(jìn)行Trizol柱純化吧。

自備試劑：

(1) Trizol試劑

(2) RNA純化柱（購(gòu)自Simgen RNA純化柱，Cat. No. 7301050）

(3) 70%乙醇

(4) DEPC處理水

實(shí)驗(yàn)儀器與耗材：

(1) RNase-free 1.5 ml離心管和移液器及吸頭

(2) 臺(tái)式小量離心機(jī)（可配離心1.5 ml離心管和2 ml離心管的轉(zhuǎn)子）

(3) 液氮與研缽

操作方法：

(1) Trizol 方法操作至離心分相，進(jìn)入以下操作步驟。

(2) 吸取上層水相轉(zhuǎn)移到一個(gè)潔凈的1.5 ml 離心管中，加入等體積的70%乙醇，勿棄吸頭，直接用吸頭吸注兩次混勻，吸取600 μl混合液轉(zhuǎn)移到核酸純化柱（核酸純化柱置于2 ml 離心管中）中，蓋上管蓋，12000 rpm 離心30秒。

(3) 棄2 ml 離心管中的濾液，將核酸純化柱置回到2 ml 離心管中，將1.5 ml 離心管中剩余的液體全部加入核酸純化柱中，蓋上管蓋，12000 rpm 離心30秒。

(4) 棄2 ml 離心管中的濾液，將核酸純化柱置回到2 ml 離心管中，在核酸純化柱中加入700 μl 70%乙醇，12000 rpm 離心30秒（最好重復(fù)洗滌一次）。

(5) 棄2 ml 離心管中的濾液，將核酸純化柱置回到2 ml 離心管中，14000 rpm 離心1分鐘。

(6) 棄2 ml 離心管，將核酸純化柱置于一個(gè)RNase-free的1.5 ml離心管中，在純化柱中加入50 -100 μl DEPC處理水，蓋上管蓋，室溫靜置1分鐘，12000 rpm 離心30秒。

(7) 棄純化柱，洗脫的RNA可立即用于各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)；或者將RNA儲(chǔ)存于-70℃備用。

使用效果：

用DIY的Trizol柱純化試劑盒提取的大腸桿菌RNA的電泳圖

第一條泳道是DL 2000 Ladder Marker，5 μl；

第二、三泳道是Trizol柱純化方法純化的細(xì)菌RNA，8 μl。

用分光光度計(jì)測(cè)得的RNA數(shù)據(jù)：

新景生物實(shí)驗(yàn)室