一.實驗?zāi)康模?/strong>

從血凝塊中提取DNA。

二.實驗材料：

兩個血凝塊樣本、手術(shù)刀、血凝塊DNA純化試劑盒（Simgen，Cat.No.4201050）、2×Taq Plus PCR Master Mix（Simgen，Cat.No.7005100）、Human β-globin gene引物（Forward：TTAGGCCTTAGCGGGCTTAGAC；Reverse：CCAGGATTTTTGATGGGACACG）。

三.實驗方法：

本次實驗采用Simgen的血凝塊DNA純化試劑盒方法來提取血凝塊DNA，步驟如下：

1. 用手術(shù)刀切取300~400 mg血凝塊，轉(zhuǎn)移血凝塊到1.5 ml離心管中；

2. 根據(jù)血凝塊的體積（按1 mg =1 μl換算），補(bǔ)加Buffer PL至終體積為500 μl；

3. 加入20 μl蛋白酶K貯存液，再加入15 μl Buffer SP，旋渦振蕩約15秒混勻。

4. 56°C水浴15分鐘；

5. 加入375 μl Buffer L1，蓋上管蓋，旋渦振蕩30秒；

6. 加入375 μl Buffer L2，劇烈搖晃離心管3~5次，再旋渦振蕩30秒混勻。 13000 rpm 離心5分鐘；

7. 吸取750 μl離心上清液加入核酸純化柱中，離心去濾液；

8. 依次用500 μl Buffer WA和600 μl Buffer WB過柱洗滌；

9. 最高速離心，去除純化柱上殘留的乙醇；

10.將核酸純化柱置于一個潔凈的1.5 ml 離心管中，用60 μl 56℃預(yù)熱的Buffer TE洗脫DNA；

11.在微量紫外分光光度計上測量DNA的濃度；

12.用2×Taq Plus PCR Master Mix擴(kuò)增Human β-globin gene，目的基因長約1.3kb。

13.瓊脂糖凝膠電泳。

四.實驗結(jié)果：

1．在微量紫外分光光度計上用Buffer TE調(diào)零，測量洗脫下來的DNA，結(jié)果如下：

2．在1%的瓊脂糖凝膠上，加入8 μl提取到的血凝塊基因組DNA，電泳20分鐘，結(jié)果如下：

M：DL15000 DNA Marker

1、2：血凝塊DNA

3．在1%的瓊脂糖凝膠上，加入5μl PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物，電泳15分鐘，結(jié)果如下：

M：DL2000 DNA Marker

1：陽性對照擴(kuò)增產(chǎn)物

2、3：血凝塊DNA擴(kuò)增產(chǎn)物

五.實驗結(jié)論：

1．用Simgen血凝塊DNA純化試劑盒從約350mg血凝塊中提取到了約10μg DNA。DNA的純度很好，A260/A280接近1.8；鹽分殘留很低，A260/A230接近2.5。

2．基因組DNA電泳檢測顯示比較完整，拖尾較少，主帶明顯。

3．從血凝塊中提取到的基因組DNA用作模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，效果良好。

六.討論：

市場上大部分品牌的血凝塊DNA提取試劑盒在提取DNA前都需要將預(yù)先血凝塊研磨再提取DNA，操作極為不便，并且提取到的DNA有降解現(xiàn)象（見網(wǎng)址鏈接http://www.dxy.cn/bbs/topic/33224165?source=rss）。Simgen血凝塊DNA純化試劑盒由于采用了其專利技術(shù)（國家發(fā)明專利號： ZL 201410377744.5），可容忍血凝塊樣本在溶解不完全的前提下提取DNA，所以無需研磨步驟，只需用蛋白酶K消化血凝塊即可，操作起來相對而言非常簡便快速。