一、異硫氰酸胍提取法

1、取200μl樣品數(shù)+陰性對(duì)照+陽性對(duì)照加入1.5ml 滅菌Eppendorf 管；

2、加600μl異硫氰酸胍，然后加入對(duì)照和樣品，再加200μl氯仿，顛倒混勻；

3、13000rpm離心15min；

4、在第3步離心快結(jié)束時(shí)，另取同樣多Eppendorf 管，加入400μl 于 -20℃預(yù)冷的異丙醇；

5、取第3步離心的上清（一定不要吸取到中間白色層，第3步離心結(jié)束往外拿的時(shí)候，管子盡量不要傾斜）轉(zhuǎn)移到第4步準(zhǔn)備的管中，顛倒混勻；

6、13000rpm離心15min，輕輕倒去上清，在吸水紙上盡量沾干液體；

7、加600μl  75%乙醇，顛倒數(shù)次以洗滌殘存異丙醇；

8、13000rpm離心15min，輕輕倒去上清，在吸水紙上盡量沾干液體；

9、4000rpm離心10sec，將管壁殘存液體甩到底部，用微量槍頭吸干，室溫干燥2~3min（不可過分干燥，防止下一步RNA不溶解）；

10、加入20μl DEPE水(加入DEPC的純水高壓后的水即為DEPE水)，輕輕混勻溶解RNA。2000rpm離心5sec，冰上保存?zhèn)溆茫ㄗ詈?/span>2小時(shí)內(nèi)使用，以免RNA降解）。

二、Trizol LS提取法

所提取物為血清、血液、細(xì)胞培養(yǎng)液、雞胚尿囊液等液體中的病毒。提取時(shí)盡量在人少時(shí)進(jìn)行，防止空氣中RNA酶的污染。所用一切物品也應(yīng)是無RNA酶。

1、在1.5ml的Eppendorf 管中加入病毒原液500μl，再加入Trizol LS 500μl，充分混勻，室溫放置10min；

2、加入200μl的氯仿，蓋緊離心管蓋，用力震蕩離心管（溶液充分乳化，成乳白狀，無分相現(xiàn)象），室溫放置10min（由于氯仿沸點(diǎn)低、易揮發(fā)，振蕩時(shí)離心管可能爆開，小心）；

3、4℃，13000r/min離心15min，取上層液相移入另一管（切忌吸動(dòng)白色中間相）；

4、加入等體積異丙醇，輕輕顛倒離心管充分混勻液體，室溫放置10min；

5、4℃，13000r/min離心15min，用槍小心吸去所有上清；

6、1ml 75%乙醇洗一遍，4℃，8000r/min離心10min，用槍小心吸去所有上清，在超凈臺(tái)中干燥5min；

7、加入適量DEPC處理水。；

8、建議立即做RT。若要保存，可在上一步加入乙醇后凍存于-70℃，可保存一年；若加入DEPC水后則只能在-20℃保存1個(gè)月左右。

三、Trizol法提取法

Trizol法適用于人類、動(dòng)物、植物、微生物的組織或培養(yǎng)細(xì)菌，樣品量從幾十毫克至幾克。

1、取雞胚尿囊液，加入5-10倍體積Trizol液，混勻；

2、室溫放置5分鐘，然后以每1ml Trizol液加入0.2ml的比例加入氯仿，蓋緊離心管，用手劇烈搖蕩離心管15秒；

3、取上層水相于一新的離心管，按每ml Trizol液加0.5ml異丙醇的比例加入異丙醇，室溫放置10分鐘，12000g離心10分鐘；

4、棄去上清液，按每ml Trizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇，混勻，4℃下 7500g離心5分鐘；

5、重復(fù)第4步；

6、小心棄去上清液，然后室溫干燥5-10分鐘，注意不要干燥過分，否則會(huì)降低RNA的溶解度；

7、然后將RNA溶于水中，放置10分鐘。