答：

可能的原因：

1) Buffer I中所含的RNase A活性降低。如果加入RNase A的Buffer I在2~8℃保存的時間超過6個月的，應(yīng)再補(bǔ)充RNase A至終濃度100 μg/ml。

2) 菌液量過多或者細(xì)菌本身特性導(dǎo)致RNA含量過多，不能完全被RNase A降解。可以增加Buffer I中RNase A的濃度。

3) 冬季環(huán)境溫度低，會導(dǎo)致RNase A活性降低，可在中和步驟后將中和產(chǎn)物放置到37℃水浴5-15分鐘后再進(jìn)入下一步操作，以提高RNase A的消化效率。