答：

可能的原因：

1） Buffer W2中未加入無水乙醇，應(yīng)按比例補加無水乙醇。如果是錯誤地加入了其他試劑，請向我公司技術(shù)部尋求幫助。

2） Buffer W2中錯誤地加入了70%乙醇。請向我公司技術(shù)部尋求幫助。

3） 細(xì)菌培養(yǎng)物中污染有真菌或其他雜菌（！注意：只針對原核生物起作用的抗生素對真菌無效）。確保從新鮮制備的含抗生素的平板中挑取單克隆菌落接種培養(yǎng)。

4） 質(zhì)粒未轉(zhuǎn)化到宿主菌中。確保從新鮮制備的含抗生素的平板中挑取單克隆菌落接種培養(yǎng)，并確保在培養(yǎng)基中加入對應(yīng)的抗生素。

5） 不要吸取儲存的甘油菌直接進行細(xì)菌培養(yǎng)。具體參考第3頁“起始樣本”內(nèi)容。

6） 分離純化的是低拷貝質(zhì)粒。請選擇質(zhì)粒小提中量試劑盒，加大菌液用量提取質(zhì)粒DNA。

7） Buffer II有白色沉淀產(chǎn)生。如有沉淀則應(yīng)將Buffer II置于37℃水浴直至沉淀溶解后再使用。

8） Buffer II使用完后未蓋緊瓶蓋，與空氣長期接觸導(dǎo)致溶菌效率下降。請制備新鮮的Buffer II：1% SDS, 0.2M NaOH。

9） 菌體未懸浮充分。菌體未懸浮充分前勿加入Buffer II。

10） 錯誤地使用了Buffer W1和Buffer W2的洗滌順序。確保按正確的順序洗滌純化柱。

11） DNA的洗脫效率差。參考第5頁柱純化技術(shù)中的第4點“洗脫質(zhì)粒DNA”內(nèi)容優(yōu)化DNA的洗脫方案。

質(zhì)粒上插入的基因的表達產(chǎn)物對細(xì)菌有毒性，影響了細(xì)菌的正常生長。