質(zhì)粒DNA電泳帶型異常
1) 正常的質(zhì)粒DNA帶型,見圖1:
C泳道:空載體pUC19電泳效果。頂部條帶1:二聚體質(zhì)粒DNA;中間條帶2:含切口的質(zhì)粒DNA;下部條帶3:超螺旋質(zhì)粒DNA。
A泳道:空載體pUC19單酶切效果。
B泳道:含插入片段的pUC19雙酶切效果。
2) 異常的質(zhì)粒DNA帶型,見圖2:
獲得的質(zhì)粒DNA二聚體含量很高,或者純化的質(zhì)粒DNA于﹣20℃儲存一段時間后二聚體增多(見圖2泳道1)。質(zhì)粒二聚體或者多聚體含量的增多與選擇的宿主菌有關,但是質(zhì)粒二聚體或者多聚體的存在并不影響質(zhì)粒DNA酶切的電泳帶型(見圖2泳道2)。用TE溶液(10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0)替代Buffer E或去離子水洗脫質(zhì)粒DNA后儲存于﹣20℃于有助于減少質(zhì)粒二聚體的產(chǎn)生。