實(shí)驗(yàn)室的小伙伴們都知道，提取DNA的血液樣本需要放在﹣20℃冷凍保存，如果是為了提取RNA還必須放在﹣80℃保存才行。萬一不小心將血液樣本遺忘在4℃冰箱幾個(gè)星期的話，血液中的RNA估計(jì)已經(jīng)完全沒救了，那DNA的情況又是怎么樣的呢？正好實(shí)驗(yàn)室這有一管血液不小心放在4℃兩個(gè)月了，讓我們一起來測試一下吧！

一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/span>

測試提取4℃下放置2個(gè)月的抗凝全血中的DNA。

二.實(shí)驗(yàn)材料：

4℃放置2個(gè)月的抗凝全血

全血DNA小量試劑盒（SIMGEN Cat.No.3001050）

全血/培養(yǎng)細(xì)胞DNA試劑盒（SIMGEN Cat.No.3002050）

2×PCR Mix（Simgen，Cat.No.7003100）、Human β-globin gene引物（Forward：TTAGGCCTTAGCGGGCTTAGAC；Reverse：CCAGGATTTTTGATGGGACACG）。

旋渦震蕩器（越新儀器，XH-C）

電子恒溫不銹鋼水浴鍋（上海宜昌儀器紗篩廠）

臺(tái)式離心機(jī)（eppendorf Centrifuge 5415 D）

超微量分光光度計(jì)（SIMGEN Cat.No.sim100）

電泳儀（北京六一儀器廠，DYY-6C型 ）

PCR儀（Techne FPROGO5Y Progene Thermal）

三.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：

四.實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

1. 在超微量分光光度計(jì)上用各自試劑盒中的BufferTE調(diào)零，測量提取好的DNA，結(jié)果如下：

樣品編號1、2為全血DNA小量試劑盒提取的DNA；樣品編號3、4為全血/培養(yǎng)細(xì)胞DNA試劑盒提取的DNA

2. 在1%的瓊脂糖凝膠上，加入5 μl提取到的DNA，電泳25 min，結(jié)果如下：

3. 在1%的瓊脂糖凝膠上，加入5 μl擴(kuò)增產(chǎn)物，電泳20 min，結(jié)果如下：

五.實(shí)驗(yàn)討論與分析：

1. 從超微量分光光度計(jì)濃度測量結(jié)果上可以看出，兩個(gè)試劑盒均提取到了一定數(shù)量的DNA，結(jié)合圖一結(jié)果可以進(jìn)一步證實(shí)4℃下放置2個(gè)月的抗凝全血中的DNA并沒有完全降解，只是拖尾嚴(yán)重，但還保留有明顯的主帶。

2. 從圖二的電泳結(jié)果分析可以得出結(jié)論：4℃放置2個(gè)月的抗凝全血中提取的DNA并不影響PCR擴(kuò)增。

3. 仔細(xì)觀察圖一中血液基因組DNA的電泳條帶，會(huì)發(fā)現(xiàn)DNA的拖尾實(shí)際上是類似DNA Marker的條帶，這是典型的凋亡細(xì)胞特征條帶。其真正的原因是白細(xì)胞（紅細(xì)胞無核，提取不到DNA）由于得不到機(jī)體提供的養(yǎng)分，已經(jīng)開始死亡，自溶。這也說明4℃條件下，血液中的DNA會(huì)緩慢地降解，確實(shí)不適合用作長期保存血液。

4. 最后我們可以告訴大家一個(gè)好消息，就是萬一不小心將血液遺忘在了4℃冰箱中，短期內(nèi)（至少2個(gè)月內(nèi)）提取DNA影響不大（主要影響就是提取到的DNA拖尾嚴(yán)重），提取到的DNA用作模板也不影響目的片段不是很長的PCR擴(kuò)增。