一、材料：

1. 樣本：鳥羽毛，由客戶提供。

2. 微量DNA提取試劑盒（Simgen，Cat.No.3102050）

4. PCR擴增試劑、引物為杭州新景生物試劑開發(fā)有限公司自配或委托上海**生物技術有限公司合成。

5. PCR儀：Techne FPROGO5Y Progene Thermal

6. 離心機：Thermo Biofuge pico

二、方法：

1. 用Simgen微量DNA提取試劑盒分離純化鳥羽毛中的DNA。

2. 按下列組分配制PCR檢測試劑( 40 μl反應體系)：

Master Mix(2×)              20.0 μl

上游引物FP                1.0 μl

下游引物RP                1.0 μl

dd H₂O                     13 μl

向每個PCR反應管中加入35 μl反應混合液，再加入5μl分離純化的DNA進行PCR檢測。

注：陽性對照用公鳥和母鳥的DNA作為模板，陰性對照用dd H₂O作為模板。

3. PCR循環(huán)條件設置：

4. 瓊脂糖凝膠電泳25 min。

三、結果判定：

有效性原則

1. 陰性對照：無擴增條帶。

2. 陽性對照：公的對照有一條擴增條帶，母的對照有兩條擴增條帶。

以上要求必須同時滿足，否則本次檢測無效。

結果：

1. 送檢的鳥羽毛鑒定為公鳥的羽毛。

2. 結果分析：

(1) 從電泳圖中的陽性對照可以看出公鳥擴增產物只有一條明顯可見的條帶，母鳥擴增產物有兩條明顯可見的條帶。

(2) 從電泳圖中可以看出送檢羽毛提取的DNA擴增產物有一條明亮的條帶和一條暗淡幾乎不可見的條帶，與公的陽性對照較為符合，判斷送檢羽毛為公鳥的羽毛。而另一條隱約可見的條帶推測是母鳥樣本污染所致，例如公鳥長期與母鳥關在一起，羽毛上可能沾染有母鳥的碎屑，導致擴增出較暗的第二條帶，當減少PCR擴增循環(huán)次數后，這種污染條帶將更加暗淡不可見。 

PCR擴增結果電泳圖：