一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/span>
比較simgen病毒核酸純化試劑盒和傳統(tǒng)煮沸法提取核酸的效果
二、實(shí)驗(yàn)方法:
1.采用Simgen病毒核酸純化試劑盒提取HBV DNA(詳見產(chǎn)品說明書);
2.采用傳統(tǒng)煮沸法提取HBV DNA
3.將所獲核酸進(jìn)行擴(kuò)增
三、實(shí)驗(yàn)樣本:
血清
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
將所得的DNA作為模板擴(kuò)增,得:
曲線1:傳統(tǒng)煮沸法提取的血清中HBV DNA作為模板的擴(kuò)增曲線(50 μl擴(kuò)增體系中加入5 μl分離的DNA)。
曲線2:Simgen病毒核酸純化試劑盒分離純化的同一血清(200 μl)中HBV DNA作為模板的擴(kuò)增曲線(50 μl擴(kuò)增體系中加入5 μl純化的DNA)。
曲線3:提高Simgen病毒核酸純化試劑盒分離純化的HBV DNA作為模板的使用量的擴(kuò)增曲線(50 μl擴(kuò)增體系中加入25 μl純化的DNA)。
五、實(shí)驗(yàn)結(jié)論:
1.根據(jù)曲線1和曲線2分析,Simgen病毒核酸純化試劑盒所提取的HBV DNA的濃度較傳統(tǒng)煮沸法更高,因此檢測靈敏度也更高。
2.根據(jù)曲線2和曲線3分析,增加HBV DNA模板使用量,CT值減小,未見明顯的抑制效果,說明采用Simgen病毒核酸純化試劑盒提取的HBV DNA純度較高,不含雜質(zhì)和抑制物。
· 20-40分鐘內(nèi)即可完成體液中總核酸的制備,同步分離純化病毒DNA或病毒RNA· 較傳統(tǒng)的煮沸法提取病毒DNA相比,檢測靈敏度增加10-50倍以上. 較傳統(tǒng)Trizol法提取病毒RNA相比,檢測靈敏度增加5-10倍以上· 添加的Carrier RNA有效提高病毒的檢測敏感性(穩(wěn)定檢測到體液中濃度為100 copies/ml的病毒)· 無須酚氯仿抽提及異丙醇沉淀步驟· 所獲的核酸不含雜質(zhì)及抑制物 查看產(chǎn)品