一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>

檢測使用Simgen糞便DNA純化試劑盒提取的糞便DNA能否進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

二、PCR檢測操作步驟：

1.取一個(gè)0.6ml離心管，加入140μl的2×Taq Plus PCR Master Mix，再加入14μl細(xì)菌16s引物（正向、反向引物各7μl），最后加入91μl超純水，混合均勻。

2.按每管35μl的體積將步驟1的混合物分裝到6個(gè)PCR管中，再分別加入5μl超純水（陰性對照）、5μl Simgen糞便DNA純化試劑盒提取的糞便DNA(四管)、5μl細(xì)菌DNA（陽性對照）。

3.擴(kuò)增條件： 

94℃,5min，

{94℃,45sec；55℃,45sec；72℃,1min30sec}×30cycles，

72℃,10min。

4.按下圖內(nèi)容進(jìn)行電泳檢測：

三、電泳結(jié)果：

1-4：用Simgen糞便DNA純化試劑盒提取的DNA（同一糞便樣本）             5：陰性對照擴(kuò)增產(chǎn)物   

6-9：用Simgen糞便DNA純化試劑盒提取的DNA作為模板的擴(kuò)增產(chǎn)物       10：陽性對照擴(kuò)增產(chǎn)物

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)論：

1. 從1-4的電泳結(jié)果分析，Simgen糞便DNA純化試劑盒成功提取到了糞便DNA，提取的DNA存在明顯降解，不過還是能明顯看到主條帶。

2. 從5-10的電泳結(jié)果分析，提取的糞便DNA成功擴(kuò)增出了條帶，且條帶清晰明顯，與陽性對照一致，說明Simgen糞便DNA純化試劑盒提取的糞便DNA潔凈度高，所含抑制物少。

綜上所述：使用Simgen糞便DNA純化試劑盒所獲得的核酸抑制物及雜質(zhì)少，能夠滿足后續(xù)PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)的需求。