異硫氰酸胍法　

取1 g葉片，液氮下充分研磨，迅速轉(zhuǎn)移至離心管，加入3 mL 異硫氰酸胍提取液(4M異硫氰酸胍、2.5 M檸檬酸鈉，pH7.0，0.5 %十二烷基肌氨酸鈉，0.1 M巰基乙醇) 混勻。再依次加入0.3 mL 2 M NaAc (pH 4.0)，3 mL水飽和酚和0.6 mL 氯仿/ 異戊醇(49∶1) ，混勻后冰浴15 min。4 ℃，12 000 r/ min 離心20 min。上清液加入等體積苯酚/ 氯仿再次抽提，離心，上清液加入等體積異丙醇，-20 ℃沉淀RNA。4 ℃，12000r/ min 離心10 min。75 %乙醇洗滌兩次，100 %乙醇脫水。溶于100μl DEPC 重蒸水中。

尿素法　

取1 g葉片，加入過(guò)量液氮充分研磨，快速轉(zhuǎn)入離心管，加入6～8倍體積的裂解緩沖液(7 M 尿素，50 mM Tris-Cl ，pH8.0，10 mM Na₂EDTA ，pH 8.0，3.5 M NaCl ，6.25 %Tris 飽和酚，pH 8.0 ，0.1 % SDS + 0.1 % LDS) ，輕輕攪拌后，0 ℃冰浴20 min。4 ℃，12000 r/ min離心15 min。上清液加1/ 3 體積3 M NaAc (pH5.3) ，1/ 5 體積的氯仿/ 異戊醇(24∶1)，混勻后0 ℃冰浴20 min。4 ℃，12000 r/ min 離心15 min。上清液加入等體積冰浴冷卻的異丙醇，冰浴10 min。4 ℃，5000 r/min 離心10 min。沉淀溶于5 mL 含有0.1 % SDS 的TE 緩沖液中，加入8M LiCl 至終濃度2.5 M，冰浴3 h 。4 ℃，12000 r/min 離心10min。75 %乙醇洗滌沉淀兩次，空氣干燥后溶于DEPC 處理水中。

Tris - 硼酸法

離心管中加15 mL 提取緩沖(150 mMTris ，50 mM EDTA ，4 % SDS ，硼酸調(diào)pH 至7.5) 和10μl 巰基乙醇，加熱到65 ℃。1 g葉片充分研磨后轉(zhuǎn)移到離心管中混勻， 65 ℃， 1min。室溫放置5 min。加1.5 mL 5 MKAc ，4 mL乙醇，渦旋。20 mL 氯仿/ 異戊醇( 24∶1) 混勻后，8000 r/min 離心20 min。上清液加入10 mL 苯酚和10 mL 氯仿/ 異戊醇，10000 r/min ，10 min。上清液中加入0.3 倍體積12 M LiCl 混勻， - 20 ℃過(guò)夜。10000 r/min ，1 min。沉淀溶于10 mL 3 MLi₂Cl 中，10000 r/ min ，10 min。沉淀溶于470μl DEPC 重蒸水，加30μl 5M KAc ，等體積氯仿/ 異戊醇抽提，10000 r/ min ，5 min。上清液轉(zhuǎn)入兩倍體積的乙醇中- 20 ℃沉淀RNA。4 ℃，10 000r/ min 離心20 min。沉淀干燥后溶于100 μl DEPC 重蒸水中。