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不同公司的RNasin產(chǎn)品性能的對比
一、實驗目的：
通過RT-PCR實驗，對寶生物（Takara）和新景生物的RNasin產(chǎn)品的性能效果進行對比。
二、實驗材料及設備：
Trizol 柱純化總RNA試劑盒（simgen）、
Fast 1st strand cDNA Synthesis Kit(with gDNase)（simgen）、
2×SYBR Green PCR Mix（simgen）、
50×ROX Reference Dye（simgen）、
水浴鍋（XMTD-6000，上海宜昌儀器紗篩廠）、
離心機（5452，德國eppendorf股份公司）、
ABI PRISM®7000熒光PCR儀（7000，美國ABI公司）、
漩渦振蕩儀（XH-C，金壇市醫(yī)療儀器廠）。
三、實驗方法：
設計：
編號 | RNA | RNase | RNasin |
T1 | 1μg | 2ng | 40U(Takara) |
T2 | 1μg | 4ng | 40U(Takara) |
T3 | 1μg | 8ng | 40U(Takara) |
T4 | 1μg | 16ng | 40U(Takara) |
S1 | 1μg | 2ng | 40U(Simgen) |
S2 | 1μg | 4ng | 40U(Simgen) |
S3 | 1μg | 8ng | 40U(Simgen) |
S4 | 1μg | 16ng | 40U(Simgen) |
四、實驗步驟：
1.RNA提取
按照Trizol 柱純化總RNA試劑盒（simgen）說明書操作提取RNA，用50 μl RNase-free水洗脫。
2.RNasin抑制RNase反應
按下表配置反應體系：
組分 | 使用量 |
5×g Buffer | 2 μl |
RNA | 1 μg |
RNasin | 40 U |
RNase | X ng |
RNase-free H2O | 補至10 μl |
注：為是RNasin與RNase充分結合，所以需將RNasin和RNase先混合在一起；為使其他組分均勻，所以應多管一起配置，混勻后再分裝至各管，如配置10管量時：
組分 | 10管使用量 |
5×g Buffer | 20 μl |
RNA | 10 μg |
RNase-free H2O | 補至70 μl |
每管分裝7μl，然后在將混合后的RNasin和RNase混合加入，補RNase-free H2O至10μl，混勻。37℃30min使RNase反應，4℃保存待用。
3.cDNA合成
按Fast 1st strand cDNA Synthesis Kit(with gDNase)（simgen）說明書操作。
4.熒光PCR檢測
按2×SYBR Green PCR Mix（simgen）說明書操作。
五、實驗結果：
六、討論與分析：
1.從圖一、圖二中可看出，當RNase的量增多時，cDNA的起始濃度會降低，說明RNasin只對一部分量的RNase產(chǎn)生抑制。未抑制的RNase仍會對RNA產(chǎn)生影響；
2.從圖三到圖六可以看出，在相同量的RNase和RNasin情況下，不同公司RNasin對RNase的抑制效果是不同的，新景生物的RNasin抑制RNase活性的效果比Takara生物的RNasin的抑制RNase活性的效果好；
3.從圖七可以看出，在相同RNasin的量下，新景生物的RNasin對4ngRNase的抑制效果比Takara生物的RNasin對2ngRNase的抑制效果好，且新景生物的RNasin對8ng RNase的抑制效果接近Takara生物的RNasin對2ngRNase的抑制效果。