一、基因組DNA提取方法
1、貼壁細(xì)胞用胰酶消化，離心收集。
2、細(xì)胞重懸于冰冷的PBS漂洗一次，離心收集。試驗(yàn)步驟2再重新作一邊。
3、加入5mlDNA提取緩沖液，(10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,0.5%SDS),混勻。
4、加入25ul蛋白酶K,使終濃度達(dá)到100ug/ml,混勻，50℃水浴3h,
5、用等體積的酚抽提一次，2500rpm離心收集水相，用等體積的（酚，氯仿，異戊醇）混合物抽提一次，2500r/min離心收集水相
6、用等體積的氯仿，異戊醇抽提一次。加入等體積的5mol/L的LiCL,混勻，冰浴，10min.。
7、2500rpm離心10min.轉(zhuǎn)上清于一離心管中。加入等體積的異丙醇。室溫10min。2500rpm,離心10min。棄上清。
8、加入0.1倍體積3mol/L乙酸鈉(pH5.2)與2倍體積-20℃預(yù)冷無(wú)水乙醇。-20℃20min。
9、12000r/min,室溫離心5min。棄上清。將DNA溶于適量TE中。

二、外周血DNA提取技術(shù)
1、取靜脈血5ml，EDTA抗凝，2500rpm離心10min。
2、小心吸取上層血漿，分裝到3個(gè)0.5ml離心管中。
3、在血細(xì)胞中加入3倍體積的溶血液，搖勻，冰浴15min。
4、2500rpm離心10min，棄上清。
5、加入10ml溶血液，搖勻，冰浴15min。
6、3000rpm離心10min，棄上清。
7、倒置離心管，去掉殘液。
8、得白細(xì)胞，－80℃凍存。

三、氯仿法抽提外周血白細(xì)胞基因組DNA：
試驗(yàn)試劑：

Ligsis buffer：
133mM NH₄ClNHC  l7.12g 0.9mM NH₄HCO₃ NH₄HCO 30.071g  0.1mMEDTA  0.5mM EDTA  0.2ml；最后加滅菌去離子水至1000ml，高壓滅菌。

ACD抗凝劑：

檸檬酸1.68g檸檬酸鈉4.62g葡萄糖5.15g；最后加滅菌去離子水至350ml，高壓滅菌。

提取緩沖液（Extraction buffer）：

10mMTrisCl(PH=8.0) 1MTris.Cl(PH=8.0) 1ml0.1mMEDTA(PH=8.0) 0.5mMEDTA(PH=8.0) 20ml0.5%SDS10%SDS0.5ml；最后加滅菌去離子水至100ml，高壓滅菌

試驗(yàn)步驟：
1、在500μl抗凝血中加入ligsisbuffer1000μl，充分顛混至清亮。以4000rpm，離心5min。棄上清液。
2、沉淀中加入ligsisbuffer1500μl，充分勻漿。以6000rpm，離心5min。
3、徹底棄去上清，加入extractionbuffer500μl（裂解細(xì)胞），混勻置于37℃，水溶1h。
4、加入8μl的蛋白酶K，顛混，37℃過(guò)夜（或55℃，3h，但是37℃效果要好些）。
5、每管加入450μl飽和酚（取溶液下層）緩慢搖晃10min，以5500rpm，離心15min。
6、取上清，每管加入250μl飽和酚和250μl氯仿－異戊醇，搖勻10min，以5500rpm，離心15min。
7、取上清，每管加入500μl氯仿－異戊醇，搖勻10min，以5500rpm，離心15min。
8、取上清，每管加50μl的3M的NaAC+，適量無(wú)水乙醇（預(yù)冷）至滿(mǎn)，搖勻放入-20℃保存2h以上。
9、以12000rpm，離心20min。去上清，加入70％乙醇500μl，以12000rpm，離心5min，去上清，50-60℃干燥。
10、加入50μl滅菌去離子水，轉(zhuǎn)彈，混勻。

四、NaI提取法提取外周血白細(xì)胞基因組：
1、取外周抗凝血（全血）100ul于eppendorf管中，12000rpm離心12min。
2、棄上清，加雙蒸水200ul溶解，搖勻20s。
3、混勻后加6MNaI溶液200ul，搖勻20s。
4、加入氯仿/異戊醇（24：1）400ul，邊加邊搖，搖勻20s，12000rpm離心12min。
5、取上層液350ul，加入另一新eppendorf管中，加0.6倍體積異丙醇，搖勻20s，室溫放置15min，靜置后的反應(yīng)體系15000rpm離心12min，使沉淀緊貼eppendorf管壁。
6、棄異丙醇，加70％乙醇1ml（不振動(dòng)），以15000rpm離心12min。
7、棄乙醇，敞開(kāi)eppendorf管蓋，烘干（37℃恒溫箱）后，加1xTE溶液30ul，溶解DNA＞12h以上，制成的DNA液-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>

五、外周血白細(xì)胞基因提取方法：
1、將1mlEDTA抗凝貯凍血液于室溫解凍后移入5ml離心管中，加入1ml磷酸緩沖鹽溶液（PBS），混勻，3500rpm離心15min,傾去含裂解紅細(xì)胞的上清。重復(fù)一次。用0.7mlDNA提取液混懸白細(xì)胞沉淀，37℃水浴溫育1h。
2、將上述DNA提取液混懸白細(xì)胞，37℃水浴溫育1h后，加入1mg/ml蛋白酶K0.2ml,至終濃度為100-200ug/ml,上下轉(zhuǎn)動(dòng)混勻，液體變粘稠。50℃水浴保溫3h，裂解細(xì)胞，消化蛋白。保溫過(guò)程中，應(yīng)不時(shí)上下轉(zhuǎn)動(dòng)幾次，混勻反應(yīng)液。
3、反應(yīng)液冷卻至室溫后，加入等體積的飽和酚溶液，溫和地上下轉(zhuǎn)動(dòng)離心管5-10min，直至水相與酚相混勻成乳狀液。5000rpm離心15min，用大口吸管小心吸取上層粘稠水相，移至另一離心管中。重復(fù)酚抽提一次。加等體積的氯仿：異戊醇（24：1），上下轉(zhuǎn)動(dòng)混勻，5000rpm離心15min，用大口吸管小心吸取上層粘稠水相，移至另一離心管中。重復(fù)一次。
4、加入1/5體積的3mol/LNaAc及2倍體積的預(yù)冷的無(wú)水乙醇，室溫下慢慢搖動(dòng)離心管，即有乳白色云絮狀DNA出現(xiàn)。用玻璃棒小心挑取云絮狀的DNA，轉(zhuǎn)入另一1.5ml離心管中，加70%乙醇0.2ml，以5000rpm離心5min。洗滌DNA，棄上清，去除殘留的鹽。重復(fù)一次。室溫?fù)]發(fā)殘留的乙醇，但不要讓DNA完全干燥。加TE液20ul溶解DNA,置于搖床平臺(tái)緩慢搖動(dòng)，DNA完全溶解通常需12-24h。制成的DNA液-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>

六、真核細(xì)胞DNA的制備

試劑準(zhǔn)備：
1、TE:10mMTris-HCl(pH7.8);    1mM EDTA(pH8.0)。
2、TBS:25mMTris-HCl(pH7.4);   200mM NaCl;5mMKCl。
3、裂解緩沖液：250mMSDS;使用前加入蛋白酶K至100mg/ml。
4、20%SDS
5、2mg/ml蛋白酶K
6、Tris飽和酚（pH8.0）、酚/氯仿（酚∶氯仿=1∶1）、氯仿
7、無(wú)水乙醇、75%乙醇
試驗(yàn)步驟：
材料處理：
1、新鮮或冰凍組織處理：
1)取組織塊0.3-0.5cm3,剪碎，加TE0.5ml，轉(zhuǎn)移到勻漿器中勻漿。
2)將勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5ml離心管中。
3)加20%SDS25ml，蛋白酶K(2mg/ml)25ml，混勻。
4)60°C水浴1-3hr。
2、培養(yǎng)細(xì)胞處理：
1)將培養(yǎng)細(xì)胞懸浮后，用TBS洗滌一次。
2)離心4000g×5min，去除上清液。
3)加10倍體積的裂解緩沖液。
4)50-55°C水浴1-2hr。
DNA提?。?/span>
1、加等體積飽和酚至上述樣品處理液中，溫和、充分混勻3min。
2、離心5000g×10min，取上層水相到另一1.5ml離心管中。
3、加等體積飽和酚，混勻，離心5000g×10min，取上層水相到另一管中。
4、加等體積酚/氯仿，輕輕混勻，離心5000g×10min，取上層水相到另一管中。如水相仍不澄清，可重復(fù)此步驟數(shù)次。
5、加等體積氯仿，輕輕混勻，離心5000g×10min，取上層水相到另一管中。
6、加1/10體積的3M醋酸鈉（pH5.2）和2.5倍體積的無(wú)水乙醇，輕輕倒置混勻。
7、待絮狀物出現(xiàn)后，離心5000g×5min，棄上清液。
8、沉淀用75%乙醇洗滌，離心5000g×3min，棄上清液。
9、室溫下?lián)]發(fā)乙醇，待沉淀將近透明后加50-100mlTE溶解過(guò)夜。