一、水煮模板法——主要用于PCR反應(yīng)

1、  接種單菌落于LB或平板中，連續(xù)劃線，37℃培養(yǎng)18-24小時(shí)。

2、  刮取1～2接種環(huán)菌苔加入150ul三蒸水中，混勻，100℃煮沸10min。

3、  12000轉(zhuǎn)/分鐘離心10min，取上清液，-20℃保存?zhèn)溆谩?/span>

二、CTAB/NaCl法

1、  接種一單菌落于5mlLB中，30℃培養(yǎng)過夜。

2、  取1ml種子培養(yǎng)液接入1002%LB中，37℃、220r/min培養(yǎng)16小時(shí)。

3、  5000r/min離心10min棄去上清。

4、  加入10mlTE離心洗滌后，用10mlTE溶解菌體，混勻，-20℃保存?zhèn)溆谩?/span>

5、  取3.5 ml菌懸液，加入184ul10%SDS，混勻，加入37ul10mg/ml蛋白酶k，混勻，37℃溫育1小時(shí)。

6、  加入740ul5mol/NaCl，再加入512 ul CTAB/NaCl,混勻，65℃溫育10min。

7、  加入等體積的氯仿/異戊醇，混勻，10000r/min離心5min，保留上清。

8、  上清中加入等體積的酚：氯仿：異戊醇（25:24:1），混勻，10000r/min離心5min，保留上清。

9、  加入0.6倍的異丙醇，混勻，10000r/min離心5min，收集DNA沉淀，用70%乙醇離心洗滌DNA沉淀。

10、用1 mlTE溶解DNA加入終濃度為20ug/mlRNaseA,4℃保存。