首先讓我們來看下求助的帖子:
還有以下用戶和我們的QQ交流截圖:
用戶試用Simgen血凝塊DNA試劑盒后采取的行動:
那么問題來了,Simgen試劑盒有什么魔力,用戶試過后立馬就下單了??!
我們先對比下兩家公司產(chǎn)品的操作步驟:
可以看出來Simgen試劑盒和Tian***試劑盒操作步驟差異主要集中在過柱前(黃底色內(nèi)容部分)的內(nèi)容:Simgen采取的方案是:直接取血凝塊用蛋白酶K融化,然后采用沉淀法取上清過柱純化DNA;Tian***采取的方案比較復(fù)雜,但似乎只是參考了傳統(tǒng)的方法(以液化柱替換了研缽研磨),收集沉淀物提取DNA。
用戶是因為Tian***的操作步驟太復(fù)雜才選擇Simgen試劑盒的嗎,那倒未必,畢竟Tian***的市場知名度大于Simgen,DNA回收率的差異估計才是最重要的,那么Tian***到底在什么步驟損失了DNA呢?
我們來分析下血凝塊形成的過程:血液凝塊是指血液中紅細(xì)胞在化學(xué)試劑、有毒物質(zhì)、生物物質(zhì)、溫度等作用下聚合成為塊狀物的現(xiàn)象,凝塊后血液由溶膠狀態(tài)變?yōu)槟z狀態(tài)的血凝塊,如在纖維蛋白的網(wǎng)狀作用下將紅細(xì)胞收在一起就形成了血液凝塊(摘自百度百科)。當(dāng)然這段話不完全正確,應(yīng)該說纖維蛋白的網(wǎng)狀作用下將紅細(xì)胞和白細(xì)胞收在一起就形成了血凝塊,為什么要強(qiáng)調(diào)白細(xì)胞呢,因為包括人在內(nèi)的大多數(shù)哺乳動物紅細(xì)胞是沒有細(xì)胞核的,因而也沒有核酸,只有白細(xì)胞有核,含有核酸。
因此血凝塊更像是一塊DNA含量很低的組織塊,傳統(tǒng)的處理思路是這樣的:第一步是研磨血凝塊(相當(dāng)于組織的勻漿過程,Tian***則用液化柱替代了研磨血凝塊的過程)破壞纖維蛋白的網(wǎng)狀作用,釋放血細(xì)胞,第二步是溶解紅細(xì)胞,收集白細(xì)胞的細(xì)胞核。第三步就是取細(xì)胞核溶解,消化提取DNA。
如果血凝塊是新鮮得到的,以上方法問題不大,但是如果把血凝塊冷凍后結(jié)果會怎樣呢?答案就是:損失掉大量的DNA!?。?/span>因為凍融的時候紅細(xì)胞或者白細(xì)胞都會被冰晶刺破,導(dǎo)致大量DNA溶解在解凍后的血凝塊所產(chǎn)生的血水中——Simgen實驗室曾直接吸取血水提取過DNA,獲得的DNA量大約是等體積抗凝血的一半,也就是說血凝塊滲出的血水中就已經(jīng)帶走近1/4總量的DNA,在此基礎(chǔ)上,如果繼續(xù)加溶液(比如Tian***的CL溶液)清洗已經(jīng)溶血的白細(xì)胞,則完全有可能再損失一半以上DNA的量。
Simgen血凝塊試劑盒為什么DNA回收率高?有以下幾點原因:
1. 選取的血凝塊體積大。最多可以從400 mg(相當(dāng)于400 μl體積的血凝塊)血凝塊中提取DNA。需要說明的是,形成400 μl體積的血凝塊,至少需要800 μl體積血液,也就是說一次性相當(dāng)于從800 μl全血中提取DNA。
2. 無研磨不洗滌的操作步驟。因為沒有研磨血凝塊以及洗滌細(xì)胞核的步驟,所以血凝塊凍融與否都不會影響后續(xù)DNA的回收效率。
3. 國家發(fā)明專利技術(shù)的應(yīng)用。如果把400 mg血凝塊當(dāng)做400 mg組織處理,通常會由于蛋白酶K不能徹底消化太多的蛋白質(zhì)而導(dǎo)致后續(xù)過柱堵塞等問題。但是由于Simgen采用了其特有的國家發(fā)明專利技術(shù)沉淀樣本中的各種蛋白(不論消化徹底與否),就非常巧妙地避開了過柱堵塞的難題。
最后我們看下用Simgen血凝塊試劑盒從兩個400 mg血凝塊樣本中提取的DNA效果(DNA用100 μl Buffer TE溶解洗脫)吧:
1、在微量紫外分光光度計上用Buffer TE調(diào)零,測量結(jié)果如下:
2、在1%的瓊脂糖凝膠上,加入8 μl提取到的血凝塊基因組DNA,電泳20分鐘,效果如下:
是不是很心動呢?可以掃一掃下面的二維碼觀看血凝塊DNA提取的操作視頻,或者在Simgen網(wǎng)站(www.simgen.cn)索取免費的試用裝哦。
Simgen生物實驗室
2019.11.19