產(chǎn)品介紹

Taq DNA Polymerase是從含Thermus aquaticus DNA Polymerase基因的重組E.coli菌株中分離純化的熱穩(wěn)定蛋白，分子量約90KD。具有5’→3’聚合酶活性和雙鏈特異性的5’→3’外切酶活性，無(wú)3’→5’外切酶活性。

Taq DNA Polymerase PCR產(chǎn)物為3’單個(gè)A粘末端，可直接與TA載體連接。

單位定義

74℃，30min，使10 nm dNTP摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為1個(gè)活力單位。

活性檢測(cè)條件：50 mM Tris-HCl（pH 9.0, 25℃）,50 mM NaCl, 5 mM MgCl₂,0.2 mM each dNTPs(包括[3H]-Dttp), 200 μg/ml活化的小牛胸腺DNA和0.1 mg/ml BSA。

質(zhì)量控制

SDS-PAGE 檢測(cè)純度大于99%。經(jīng)檢測(cè)無(wú)外源核酸酶活性，PCR方法檢測(cè)無(wú)宿主DNA殘留，能有效擴(kuò)增人類基因組中的單拷貝基因。

PCR體系成分

1. 模板DNA的純度：很多殘留的核酸提取試劑會(huì)影響PCR反應(yīng)，包括蛋白酶、蛋白變性劑(比如SDS、胍鹽)、高濃度鹽(KAc、NaAc、辛酸鈉等)和高濃度EDTA等。純度不高的模板（比如煮沸法獲取的模板）用量請(qǐng)勿超過(guò)PCR反應(yīng)體系的1/10（比如50 μl反應(yīng)體系中加入模板的體積不應(yīng)超過(guò)5μl）。如果模板DNA純度太差，可使用Simgen DNA純化試劑盒（Cat. No.2101050）對(duì)模板DNA進(jìn)行純化及濃縮。經(jīng)Simgen DNA純化試劑盒純化后的模板使用量可多至PCR反應(yīng)體系體積的1/2。

2.  模板DNA用量：極微量的DNA也可以作為PCR摸板，但為保證反應(yīng)的穩(wěn)定性，50 μl體系建議使用10⁴拷貝以上的靶序列作為模板。模板DNA的推薦使用量：

人基因組DNA：0.05 μg~0.5 μg/50 μl PCR反應(yīng)體系

大腸桿菌基因組DNA：10 ng~100 ng/50 μl PCR反應(yīng)體系

λ DNA：0.5 ng~5 ng/50 μl PCR反應(yīng)體系

質(zhì)粒DNA： 0.1ng ~ 10 ng/50 μl PCR反應(yīng)體系

如需用擴(kuò)增產(chǎn)物作為模板再擴(kuò)增，應(yīng)至少將擴(kuò)增產(chǎn)物稀釋1,000至10,000倍后再作為模板使用，否則可能會(huì)出現(xiàn)涂抹條帶或無(wú)特異性條帶。

3. 引物濃度：一般每條引物配制的濃度為10 μM (50×)，工作濃度為0.2 μM。引物過(guò)量可能會(huì)出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增，引物過(guò)少則可能會(huì)降低擴(kuò)增效率。

4. Mg²⁺濃度：Mg²⁺濃度對(duì)Taq酶的活性影響非常大，一般終濃度范圍在1.5 mM~5 mM之間。Mg²⁺濃度過(guò)高可能會(huì)出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增，Mg²⁺濃度過(guò)低則可能會(huì)降低擴(kuò)增效率。