RNA降解
1、新鮮組織:某些富含內(nèi)源核酸酶的樣品(如肝臟,胸腺等),不可直接勻漿,應(yīng)在加入部分Buffer TL的條件下用研磨棒將組織研成勻漿狀。
2、樣本貯存:組織樣本取材后應(yīng)立即置于液氮中速凍,然后移至﹣70℃冰箱保存;細(xì)胞樣本應(yīng)在收集后直接加入1 ml Buffer TL,然后移至﹣70℃冰箱保存。如果不能立即放入﹣70℃冰箱保存,可選購RNA樣本保存液(Simgen Cat. No. 4007020/4007100)。
3、外源RNA酶的污染:試劑,器械及實驗環(huán)境中的RNA酶進(jìn)入實驗系統(tǒng)。參考第2頁“防止RNA酶污染的注意事項”改善實驗條件和實驗環(huán)境,并確保在RNA提取專用實驗室提取RNA。
4、當(dāng)使用RNA樣本保存液時,應(yīng)注意以下事項:
A. 只選用新鮮的、未反復(fù)凍融的樣本加入RNA樣本保存液保存;
B. 樣本中加入RNA樣本保存液后不要長時間室溫存放。RNA樣本保存液保存樣本是有時間期限的,一般在37℃下只能保存1天,在15-20℃下可延長至1周,在2-8℃可延長至4周,若長期保存,應(yīng)保存在﹣20℃以下。
5、電泳檢測時,推薦使用甲醛變性膠電泳(參考分子克隆第三版第540頁)。如果沒有甲醛變性膠電泳的條件,關(guān)注simgenbio微信公眾號查詢《如何做好RNA電泳實驗》文章,獲取相關(guān)實驗技巧。