1.用20 ml培養(yǎng)基培養(yǎng)單菌過(guò)夜,用快速質(zhì)粒DNA小量試劑盒提取,濃度只能達(dá)到160-230 ng/μl?
2.按照說(shuō)明書(shū)中,挑一個(gè)單克隆到5毫升的培養(yǎng)基中,搖12-16小時(shí),然后直接離心操作后,使用100μl洗脫液洗脫,質(zhì)粒DNA最低濃度70ng/μl最高270ng/μl,一般140ng/μl,是不是提到的質(zhì)粒DNA濃度一般都這個(gè)水平?
1.快速質(zhì)粒DNA小量試劑盒說(shuō)明書(shū)中寫(xiě)的是用1-5 ml培養(yǎng)基培養(yǎng)單菌過(guò)夜,不能用20 ml培養(yǎng)基提質(zhì)粒DNA,菌太多會(huì)導(dǎo)致難以裂解,影響實(shí)驗(yàn)操作和減少質(zhì)粒得率。在實(shí)驗(yàn)操作時(shí),切記按照說(shuō)明書(shū)的步驟來(lái)操作,如果按照以往經(jīng)驗(yàn)或者前輩的方法,結(jié)果反而會(huì)適得其反。
2.因?yàn)槭翘粢粋€(gè)單克隆到5毫升的培養(yǎng)基中培養(yǎng),每個(gè)培養(yǎng)基的生產(chǎn)狀況不一樣,最后得到的質(zhì)粒濃度偏差大是正常的。影響質(zhì)粒提取濃度有很多因素,質(zhì)粒的拷貝數(shù)情況、細(xì)菌生長(zhǎng)情況、提取時(shí)菌液用量等。