可能的原因：1、Buffer W2中未加入無水乙醇，應(yīng)按比例補(bǔ)加無水乙醇。如果是錯(cuò)誤地加入了其他試劑，請(qǐng)向我公司技術(shù)部尋求幫助。2、 Buffer W2中錯(cuò)誤地加入了70%乙醇。請(qǐng)向我公司技術(shù)部尋求幫助。3、 細(xì)菌培養(yǎng)物中污染有真菌或其他雜菌（！注意：只針對(duì)原核生物起作用的抗生素對(duì)真菌無效）。確保從新鮮制備的含抗生素的平板中挑取單克隆菌落接種培養(yǎng)。4、質(zhì)粒未轉(zhuǎn)化到宿主菌中。確保從新鮮制備的含抗生素...... 查看回答 ​

1、細(xì)菌沉積在管底，難以用旋渦振蕩充分懸浮。如果要收集超過5ml細(xì)菌培養(yǎng)物，卻仍然使用快速收集菌體（12000 rpm 離心30秒）的方法，可能會(huì)導(dǎo)致收集的菌體難以懸浮，此時(shí)可嘗試用移液器吸頭吹打菌體沉淀的方法懸浮細(xì)菌；或者改為3000 rpm離心5分鐘收集菌體。2、加入Buffer II后，溶液變得非常粘稠，無法流動(dòng)。通常造成上述原因是細(xì)菌用量過多所至，請(qǐng)適當(dāng)減少細(xì)菌用量。3、加入Buffer ...... 查看回答 ​

1、 限制性酶切后電泳質(zhì)粒消失，沒有條帶，或者電泳條帶出現(xiàn)嚴(yán)重的拖尾現(xiàn)象。可能是選用了野生型的或者是end A+的宿主菌所致，并且未用Buffer W1洗滌純化柱。請(qǐng)確保用Buffer W1洗滌純化柱，或者按附錄中的方法對(duì)質(zhì)粒DNA作進(jìn)一步的純化。2、 酶切不能完全切開。本試劑盒純化得到的質(zhì)粒DNA不存在酶切抑制物，可直接用于酶切（比如20 μl酶切體系中，除去2 μl 10×酶切緩沖液和1 μl...... 查看回答 ​

1、正常的質(zhì)粒DNA帶型，見圖1:C泳道：空載體pUC19電泳效果。頂部條帶1：二聚體質(zhì)粒DNA；中間條帶2：含切口的質(zhì)粒DNA；下部條帶3：超螺旋質(zhì)粒DNA。A泳道：空載體pUC19單酶切效果。B泳道：含插入片段的pUC19雙酶切效果。2、異常的質(zhì)粒DNA帶型，見圖2：獲得的質(zhì)粒DNA二聚體含量很高，或者純化的質(zhì)粒DNA于﹣20℃儲(chǔ)存一段時(shí)間后二聚體增多（見圖2泳道1）。質(zhì)粒二聚體或者多聚體含量...... 查看回答 ​

可能的原因：1、Buffer I中所含的RNase A活性降低。如果加入RNase A的Buffer I在2~8℃保存的時(shí)間超過6個(gè)月的，應(yīng)再補(bǔ)充RNase A至終濃度100 μg/ml。2、菌液量過多或者細(xì)菌本身特性導(dǎo)致RNA含量過多，不能完全被RNase A降解?？梢栽黾覤uffer I中RNase A的濃度。冬季環(huán)境溫度低，會(huì)導(dǎo)致RNase A活性降低，可在中和步驟后將中和產(chǎn)物放置到37℃水...... 查看回答 ​

可能的原因：1、溶解步驟操作太劇烈：加入Buffer II后應(yīng)溫和地翻轉(zhuǎn)離心管使細(xì)菌溶解。2、溶解步驟停留時(shí)間過長：加入Buffer II后靜置時(shí)間不應(yīng)超過5分鐘。3、中和步驟操作太劇烈：加入Buffer N8(III)后應(yīng)溫和地翻轉(zhuǎn)離心管使溶液中和。4、細(xì)菌的培養(yǎng)時(shí)間超過16小時(shí)，導(dǎo)致部分細(xì)菌出現(xiàn)了溶菌現(xiàn)象。5、細(xì)菌不是新鮮收集的或者收集好后在冰箱放置時(shí)間過久。...... 查看回答 ​

1.快速質(zhì)粒DNA小量試劑盒說明書中寫的是用1-5 ml培養(yǎng)基培養(yǎng)單菌過夜，不能用20 ml培養(yǎng)基提質(zhì)粒DNA，菌太多會(huì)導(dǎo)致難以裂解，影響實(shí)驗(yàn)操作和減少質(zhì)粒得率。在實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，切記按照說明書的步驟來操作，如果按照以往經(jīng)驗(yàn)或者前輩的方法，結(jié)果反而會(huì)適得其反。2.因?yàn)槭翘粢粋€(gè)單克隆到5毫升的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，每個(gè)培養(yǎng)基的生產(chǎn)狀況不一樣，最后得到的質(zhì)粒濃度偏差大是正常的。影響質(zhì)粒提取濃度有很多因素，質(zhì)粒的拷...... 查看回答 ​