一、材料：

1. 樣本：鳥羽毛，由客戶提供。

2. 微量DNA提取試劑盒（Simgen，Cat.No.3102050）

3. PCR擴增試劑、引物為杭州新景生物試劑開發(fā)有限公司自配或委托上海**生物技術(shù)有限公司合成。

4. PCR儀：Techne FPROGO5Y Progene Thermal

5. 離心機：Thermo Biofuge pico

二、方法：

1. 用Simgen微量DNA提取試劑盒分離純化鳥羽毛中的DNA。

2. 按下列組分配制PCR檢測試劑( 40 μl反應(yīng)體系)：

Master Mix(2×)              20.0 μl

上游引物FP                1.0 μl

下游引物RP                1.0 μl

dd H₂O                     13 μl

向每個PCR反應(yīng)管中加入35 μl反應(yīng)混合液，再加入5μl分離純化的DNA進行PCR檢測。

注：陽性對照用公鳥和母鳥的DNA作為模板，陰性對照用dd H₂O作為模板。

3. PCR循環(huán)條件設(shè)置：

4. 瓊脂糖凝膠電泳30 min。

三、結(jié)果判定：

有效性原則

1. 陰性對照：無擴增條帶。

2. 陽性對照：公的對照有一條擴增條帶，母的對照有兩條擴增條帶。

以上要求必須同時滿足，否則本次檢測無效。

結(jié)果：

1. 送檢的“鳳梨”、“和尚”鳥羽毛鑒定結(jié)果均為公鳥的羽毛。

2. 結(jié)果分析：

①從電泳圖中的陽性對照可以看出公鳥擴增產(chǎn)物只有一條明顯可見的條帶，母鳥擴增產(chǎn)物有兩條明顯可見的條帶。

②從電泳圖中可以看出送檢“和尚”羽毛提取的DNA的擴增產(chǎn)物只有一條明亮的條帶，與公的陽性對照符合，判斷為公鳥的羽毛。

③從電泳圖中可以看出送檢“鳳梨”羽毛提取的DNA的擴增產(chǎn)物比較暗淡，結(jié)果不是很明顯，只能隱約看出有一條暗淡的條帶，與公的陽性對照符合，因此判斷為公鳥的羽毛。由于此樣本只寄送了一根羽毛，無法進行復(fù)檢驗證。擴增產(chǎn)物條帶暗淡是由于提取到的DNA量較少，DNA量少則是由樣本原因?qū)е碌?。有可能是因為送檢的羽毛不是新鮮拔下的，是自然脫落的，這將導(dǎo)致羽毛中含有的DNA降解嚴(yán)重，提取到的DNA量會變少，導(dǎo)致擴增產(chǎn)物比較暗淡。

PCR擴增結(jié)果電泳圖：