方法一：石英砂法

1、5000rpm×5min 收集過(guò)夜培養(yǎng)的菌體（5ml左右），于 200μL 裂解液(50 mmol/ L Tris-HCl pH 8.0 , 180 mmol/ LEDTA pH 8.0 , 1 % SDS , 現(xiàn)配)中，加入 3/10 總體積石英砂在渦流混合器上振蕩 13min，每隔 4min 將離心管取出用力甩幾下，然后 65℃水浴 10min。
2、加入 200μL 5mol/L KAc，冰浴 8min；
3、12000rpm×5min 轉(zhuǎn)移上清至新的離心管中；
4、加入 3 mol/L NaAc 35μl，加入異丙醇 200μL混勻后冰浴 8min，12000rpm×5min收集沉淀；
5、200μL TE 溶解，加入 RNase10μL，65℃水浴 10min；
6、加入 200μL 氯仿－異戊醇（24:1）,抽提；
7、溫柔地取上清 150μL ，加入 20μL 3 mol/L NaAc 及 375μL 無(wú)水乙醇，混勻后12000rpm×8min 收集 DNA；
8、70% 乙醇洗滌沉淀，吹干后 TE 溶解，-20℃保藏。

方法二：蝸牛酶法

1. 接種于5 ml的YEPD培養(yǎng)基中在25℃-28℃振蕩培養(yǎng)12-16 h。
2. 3500 rpm離心5min沉淀細(xì)胞，用1ml 的無(wú)菌水洗滌一次，再加0.5ml solution Ⅰ(1M 山梨醇，0.1M EDTA, pH=7.5)重懸。
3. 轉(zhuǎn)移細(xì)胞至1.5 ml 的離心管中，加入0.1蝸牛酶 (30mg/ml)溶液，37℃保溫30-60min, 以獲得原生質(zhì)體。
4. 最大轉(zhuǎn)速離心1min以沉淀細(xì)胞，用500ulsolutionⅡ(50mMTris-HCl, 20mM EDTA,pH=7.4)溶液懸浮，然后加入50μl 10% SDS, 混合65℃保溫30min。
5. 加入200μl 5M 醋酸鉀，放于冰上30 min。
6. 最大轉(zhuǎn)速離心15min，轉(zhuǎn)移上清液至新的離心管中，用等體積的異丙醇沉淀DNA。
7. 室溫下放置5min，離心10min，用70%的乙醇洗滌一次，真空干燥，用50ul pH=7.4 TE溶液溶解。

方法三：蝸牛酶過(guò)夜處理法

將酵母接種到YPD培養(yǎng)基中30℃過(guò)夜培養(yǎng)16～18h，離心收集1.5mL，用滅菌水洗滌兩次；加入600μL裂解液，35μL蝸牛酶，37℃消化過(guò)夜；加入飽和酚450μL，氯仿-異戊醇(體積比24:1)150μL，輕輕顛倒混勻使溶液成為乳狀，并保持10min，3000r/min離心10min；吸取上清液，用氯仿-異戊醇(體積比24:1)450μL再抽提1次，10000r/min離心5min；取上清加入異丙醇800μL，－20℃靜置30min；10000r/min離心5min，沉淀物用70%乙醇洗兩次，自然干燥后溶于30μL TE緩沖液；加入0.5μL10mg/mL的RNaseA，37℃溫浴30min，自然冷卻后保存。

方法四：蝸牛酶反復(fù)凍融法

收集過(guò)夜培養(yǎng)16～18h的菌體1.5mL，加入500μLPBS溶液重懸菌體，12000r/min離心2min，用PBS重洗一次；將沉淀溶于35μL的蝸牛酶溶液中，加入65μL的PBS，45℃作用2h，加100μL裂解液，－20℃冷凍，然后室溫振蕩溶解，反復(fù)3次；向懸浮液中加入150μL 5mol/L KAc(pH8.9)輕輕混勻，然后10000r/min離心5min；取上清液，加入兩倍體積的無(wú)水乙醇，輕輕混勻，室溫放置5min；12000r/min離心10min，將沉淀溶解在100μL TE中；加入等體積的酚-氯仿-異戊醇(體積比25:24:1)，輕柔顛倒混勻，12000r/min離心5min，重復(fù)抽提1次；加1/10體積的3mol/L醋酸鈉(pH5.2)，2.5倍體積的無(wú)水乙醇，－20℃放置30min；10000r/min離心5min，棄上清液，用70%乙醇溶液洗滌沉淀兩次，室溫干燥后用20μL TE溶解；加入0.5μL 10mg/mL的RNaseA，37℃溫浴30min，自然冷卻后保存。

方法五：

溶解在100μL TE中；加入等體積的酚-氯仿-異戊醇(體積比25:24:1)，輕柔顛倒混勻，12000r/min離心5min，重復(fù)抽提1次；加1/10體積的3mol/L醋酸鈉(pH5.2)，2.5倍體積的無(wú)水乙醇，－20℃放置30min；10000r/min離心5min，棄上清液，用70%乙醇溶液洗滌沉淀兩次，室溫干燥后用20μL TE溶解；加入0.5μL 10mg/mL的RNaseA，37℃溫浴30min，自然冷卻后保存。

方法六：

1、配一個(gè)破菌緩沖液：
Triton X-100        2%（v/v）        SDS       1%（w/v）
NaCl        100mM       Tris-HCl（pH 8.0）       10mM
2、把酵母細(xì)胞離心收集，加200ul的石英砂或玻璃珠，加入200μl的破菌液再加200μl的酚氯仿，渦旋一分鐘，放在冰上一分鐘，一共反復(fù)4次
3、加入500μl的ddH2O，渦旋，離心，抽上清和等體積的酚氯仿混合
4、渦旋，離心，抽上清和等體積的酚氯仿混合，重復(fù)4直到離心后兩層之間沒(méi)有蛋白出現(xiàn)
5、抽上清加1ml的無(wú)水乙醇，放在-20度30min
6、離心，抽上清，再用70%乙醇洗一次，真空干燥，用TE或ddH20溶解

方法七：

接種酵母到2.5ml 酵母試管培養(yǎng)基中(YPD培養(yǎng)基)， 30℃，培養(yǎng)16～18h；取1.5ml 酵母培養(yǎng)液，室溫下， 1500 × g 離心5～10min 收集菌體；菌體用滅菌水洗1 次， 1500 ×g離心5min；菌體用200μl SCED(1mol/L 山梨醇、 10mmol/L 檸檬酸鈉、10mmol/LEDTA、10mmol/L DTT 二硫蘇糖醇)溶液重懸，加入3 0μl 10mg/ml 溶菌酶(Lysozyme)37℃溫浴1h；加入100μl 2%SDS 混勻，-20℃冰凍，然后室溫震蕩溶解，反復(fù)3 次；向懸浮液中加入150μl 5mol/L KAc(pH 8.9)輕輕混勻，然后10000r/min 離心5min；將上清轉(zhuǎn)移到一新的1.5ml 離心管中，加入 2 倍體積的乙醇，輕輕混勻，室溫放置5min 后12000r/min 離心10min；除去上清，將沉淀溶解在300μl TE(10mmol/L Tris-HCl，pH7.4，1mmol/L EDTA，pH8.0) 中，加入 6μl RNase (10mg/ml)，37℃溫浴30min；加入飽和酚和氯仿各150μl 充分混勻，然后10000r/min離心5min；轉(zhuǎn)移上清到新的1.5ml 離心管中，加入1/2體積的7.5mol/L NH4Ac(pH7.5)和等體積的異丙醇，-20℃放置20min 后 12000r/min 離心10min；除去上清，加入300μl 70% 乙醇漂洗沉淀一次，10000r/min離心5min；風(fēng)干除去乙醇，用2 0μl TE 溶解酵母DNA。