不同公司的RNasin產(chǎn)品性能的對(duì)比

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>

通過(guò)RT-PCR實(shí)驗(yàn)，對(duì)寶生物（Takara）和新景生物的RNasin產(chǎn)品的性能效果進(jìn)行對(duì)比。

二、實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備：

Trizol 柱純化總RNA試劑盒（simgen）、

Fast 1st strand cDNA Synthesis Kit(with gDNase)（simgen）、

2×SYBR Green PCR Mix（simgen）、

50×ROX Reference Dye（simgen）、

水浴鍋（XMTD-6000，上海宜昌儀器紗篩廠）、

離心機(jī)（5452，德國(guó)eppendorf股份公司）、

ABI PRISM®7000熒光PCR儀（7000，美國(guó)ABI公司）、

漩渦振蕩儀（XH-C，金壇市醫(yī)療儀器廠）。

三、實(shí)驗(yàn)方法：

設(shè)計(jì)：

四、實(shí)驗(yàn)步驟：

1.RNA提取

按照Trizol 柱純化總RNA試劑盒（simgen）說(shuō)明書(shū)操作提取RNA，用50 μl RNase-free水洗脫。

2.RNasin抑制RNase反應(yīng)

按下表配置反應(yīng)體系：

注：為是RNasin與RNase充分結(jié)合，所以需將RNasin和RNase先混合在一起；為使其他組分均勻，所以應(yīng)多管一起配置，混勻后再分裝至各管，如配置10管量時(shí)：

每管分裝7μl，然后在將混合后的RNasin和RNase混合加入，補(bǔ)RNase-free H₂O至10μl，混勻。37℃30min使RNase反應(yīng)，4℃保存待用。

3.cDNA合成

按Fast 1st strand cDNA Synthesis Kit(with gDNase)（simgen）說(shuō)明書(shū)操作。

4.熒光PCR檢測(cè)

按2×SYBR Green PCR Mix（simgen）說(shuō)明書(shū)操作。

五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

六、討論與分析：

1.從圖一、圖二中可看出，當(dāng)RNase的量增多時(shí)，cDNA的起始濃度會(huì)降低，說(shuō)明RNasin只對(duì)一部分量的RNase產(chǎn)生抑制。未抑制的RNase仍會(huì)對(duì)RNA產(chǎn)生影響；

2.從圖三到圖六可以看出，在相同量的RNase和RNasin情況下，不同公司RNasin對(duì)RNase的抑制效果是不同的，新景生物的RNasin抑制RNase活性的效果比Takara生物的RNasin的抑制RNase活性的效果好；

3.從圖七可以看出，在相同RNasin的量下，新景生物的RNasin對(duì)4ngRNase的抑制效果比Takara生物的RNasin對(duì)2ngRNase的抑制效果好，且新景生物的RNasin對(duì)8ng RNase的抑制效果接近Takara生物的RNasin對(duì)2ngRNase的抑制效果。