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前段時(shí)間有客戶詢問說是用Trizol提取大豆種子RNA失敗了，要如何才能提取大豆種子RNA？Trizol作為一種經(jīng)典RNA提取方法，確實(shí)應(yīng)用廣泛，但在提取植物樣本的RNA時(shí)就很容易出現(xiàn)問題。大豆種子中含有較多的蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物等豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，最大的可能是大豆種子中的多糖類物質(zhì)（碳水化合物）和Trizol中的硫氰酸根凝結(jié)成了不溶物，導(dǎo)致RNA釋放不出來，從而影響了RNA的提取。
還好小新手頭上有兩種不含硫氰酸根組分的植物RNA試劑盒，一種是植物總RNA試劑盒（Simgen Cat.No.5101050），這款試劑盒與國(guó)內(nèi)知名品牌T***GEN的多糖多酚植物總RNA提取試劑盒的操作步驟、提取效果都是一致的；另一種是高多糖多酚植物總RNA試劑盒（Simgen Cat.No.5103050），這款產(chǎn)品是專門為高多糖多酚樣本而生的，能解決植物總RNA試劑盒束手無策的樣本（有興趣的同學(xué)可以了解下這篇文章——《高多糖多酚植物總RNA試劑盒哪家強(qiáng)？》）。接下來就讓小新用兩種試劑盒對(duì)比提取一下大豆種子的RNA，看看能否成功，效果又是如何。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/span>
對(duì)比Simgen的兩種植物總RNA試劑盒在提取大豆種子RNA時(shí)的性能差異。
實(shí)驗(yàn)材料：
新鮮大豆種子、一次性手術(shù)刀、研缽
高多糖多酚植物總RNA試劑盒（Simgen Cat.No.5103050）、植物總RNA試劑盒（Simgen Cat.No.5101050）
超微量電子天平（DENVER INSTRUMENT，TP-213）
旋渦震蕩器（越新儀器，XH-C）
臺(tái)式離心機(jī)（eppendorf Centrifuge 5415 D）
超微量分光光度計(jì)（Simgen Cat.No.sim100）
電泳儀（北京六一儀器廠，DYY-6C型）
實(shí)驗(yàn)方法：
由于大豆非常容易研碎，本次實(shí)驗(yàn)采用裂解液浸泡樣本研磨法破碎樣本后提取RNA，具體操作步驟如下：
Simgen高多糖多酚植物總RNA試劑盒 | Simgen植物總RNA試劑盒 |
1. 稱取300 mg組織放入研缽中。加入1.8 ml已加入β-巰基乙醇的Buffer RCT，充分研磨直至組織呈勻漿狀，分別吸取700 μl勻漿液（按100 mg組織換算成100 μl勻漿物+600 μl裂解液計(jì)算）到2個(gè)RNase-free的1.5 ml離心管中； 2. 加600 μl Buffer EX，用力混合均勻后12000 rpm離心5 分鐘； 3. 吸取350 μl上清于潔凈的1.5 ml管中，加入350 μl Buffer K混合均勻，混合液全部轉(zhuǎn)移到過濾柱中，13000 rpm離心1分鐘； 4. 棄過濾柱，向?yàn)V液中加入700 μl 70％乙醇混合均勻，將混合液分兩次加入核酸純化柱中，離心棄濾液； 5. 依次加入500 μl Buffer WA和600 μl Buffer WBR洗滌； 6. 14000 rpm空離1 min去除殘留乙醇； 7. 將核酸純化柱置于潔凈的RNase-free的1.5 ml離心管中，在純化柱的膜中央加入100 μl RNase-Free Water，室溫靜置1 min，離心洗脫得到RNA。 | 1. 稱取300 mg組織放入研缽中，加入1.8 ml已加入β-巰基乙醇的Buffer RLC，充分研磨直至組織呈勻漿狀，分別吸取700 μl勻漿液（按100 mg組織換算成100 μl勻漿物+600 μl裂解液計(jì)算）到2個(gè)RNase-free的1.5 ml離心管中，13000 rpm離心2分鐘； 2. 將步驟1中的上清液全部倒入過濾柱中，蓋上管蓋，13000 rpm離心2分鐘。 3. 棄過濾柱，此時(shí)濾液上層漂浮著一層白色油脂，小心吸取下層液體轉(zhuǎn)移到一個(gè)潔凈的1.5 ml管中，加入600 μl 70％乙醇混合均勻，將混合液分兩次加入核酸純化柱中，離心棄濾液； 4. 依次加入500 μl Buffer WA和600 μl Buffer WBR洗滌； 5. 14000 rpm空離1 min去除殘留乙醇； 6. 將核酸純化柱置于潔凈的RNase-free的1.5 ml離心管中，在純化柱的膜中央加入100 μl RNase-Free Water，室溫靜置1分鐘，離心洗脫得到RNA。 |
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
1、在超微量分光光度計(jì)上用試劑盒內(nèi)的RNase-Free Water調(diào)零，測(cè)量洗脫下來的RNA，結(jié)果如下：
2、在1%的瓊脂糖凝膠上，加入5 μl洗脫的RNA進(jìn)行電泳，結(jié)果如下：
分析與討論：
1. 由濃度測(cè)量結(jié)果可以看出Simgen的兩種植物RNA試劑盒均能提出大豆種子中的RNA，植物總RNA試劑盒提取的RNA平均濃度約為275.3 ng/μl，而高多糖多酚植物總RNA試劑盒提取的RNA平均濃度約為489.3 ng/μl，濃度更高；從電泳結(jié)果也能看出高多糖多酚植物總RNA試劑盒提取的RNA條帶更亮，與濃度數(shù)值有很好的對(duì)應(yīng)關(guān)系。因此高多糖多酚植物總RNA試劑盒提取大豆種子RNA的效果更好。
2. 使用植物總RNA試劑盒時(shí)，大豆種子加裂解液研磨離心（步驟1）后，會(huì)發(fā)現(xiàn)有一層白色油脂漂浮于上清液表面，且經(jīng)過濾柱過濾（步驟2）后仍有殘留（見下圖）。為避免油脂對(duì)后續(xù)RNA的洗滌和洗脫造成影響，因此增加了步驟3中“此時(shí)濾液上層漂浮著一層白色油脂，小心吸取下層液體轉(zhuǎn)移到一個(gè)潔凈的1.5 ml管中”的操作，使得操作變得更麻煩了。
綜上，雖然兩種試劑盒均能提取大豆種子的RNA，但是高多糖多酚植物總RNA試劑盒效果更好，不僅提取的濃度更高，而且排除了大豆種子中油脂的干擾，操作顯得更為方便。
· 通用性極強(qiáng)，完美解決Trizol試劑無法提取的高粘多糖植物樣本的總RNA提取問題· 30-40分鐘內(nèi)即可完成RNA提取實(shí)驗(yàn)· 獲得的RNA純度非常高，鹽分含量極低· 無需酚氯仿抽提步驟· 流程更優(yōu)化，結(jié)果有保障 查看產(chǎn)品
·提供供兩套裂解液體系，可以解決各種簡(jiǎn)單的植物組織、富含多糖多酚的植物組織、水果果肉、真菌等的 RNA 提取·無需使用酚氯仿、β-巰基乙醇等有毒試劑·無需耗時(shí)的醇類沉淀，可以快速提取總 RNA·過濾柱技術(shù)快速去除組織溶解物中的雜質(zhì) 查看產(chǎn)品