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如何提取松杉綱植物樣本的DNA

作者:新景實(shí)驗(yàn)室
版權(quán)說(shuō)明:本文系原創(chuàng)文章 轉(zhuǎn)載請(qǐng)標(biāo)注出處和本文鏈接

前段時(shí)間,小新在做植物DNA提取實(shí)驗(yàn)時(shí)失敗了,重復(fù)實(shí)驗(yàn)后還是沒(méi)有提取到DNA。當(dāng)時(shí)使用的樣本是羅漢松的葉片,小新查了相關(guān)資料了解到羅漢松屬于裸子植物亞門松杉綱,這類植物都是復(fù)雜抗逆植物,核酸較難提取。于是小新就想到了植物/真菌DNA試劑盒,這款試劑盒在之前的文章中也出現(xiàn)過(guò),當(dāng)時(shí)提取的是真菌樣本。其實(shí)它不僅能提取復(fù)雜的真菌樣本,同樣也能提取復(fù)雜的植物樣本。

為了驗(yàn)證植物/真菌DNA試劑盒確實(shí)能提取這類樣本的DNA,小新又選了3松杉綱植物(濕地松、雪松、水杉)進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn),下面就讓我們看看結(jié)果如何。

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>

對(duì)比Simgen的兩種植物DNA提取試劑盒對(duì)松杉綱植物DNA提取效果的差異。

 

實(shí)驗(yàn)材料:

1. 濕地松、雪松、水杉、一次性手術(shù)刀、研缽

2. 植物DNA試劑盒Simgen Cat.No.3201050、植物/真菌DNA試劑盒Simgen Cat.No.3200050

3. 超微量電子天平(DENVER INSTRUMENT,TP-213

4. 電子恒溫不銹鋼水浴鍋(上海宜昌儀器紗篩廠)

5. 旋渦振蕩器(越新儀器,XH-C

6. 臺(tái)式離心機(jī)(eppendorf Centrifuge 5415 D

7. 超微量分光光度計(jì)(Simgen Cat.No.sim100

8. 電泳儀(北京六一儀器廠,DYY-6C型)

實(shí)驗(yàn)方法:

操作步驟如下:

simgen-植物DNA試劑盒-植物/真菌DNA試劑盒-操作步驟圖

實(shí)驗(yàn)結(jié)果:

1、在超微量分光光度計(jì)上分別用各自試劑盒的Buffer TE調(diào)零,測(cè)量洗脫下來(lái)的DNA,結(jié)果如下:

洗脫下來(lái)的DNA測(cè)量結(jié)果

2、1%的瓊脂糖凝膠上,加入5 μl洗脫的DNA進(jìn)行電泳,結(jié)果如下:

simgen-植物DNA試劑盒-植物/真菌DNA試劑盒-電泳圖一

simgen-植物DNA試劑盒-植物/真菌DNA試劑盒-電泳圖二

討論與分析:

1. 從濃度測(cè)量結(jié)果來(lái)看,可以明顯看到兩個(gè)試劑盒提取效果的差異。植物DNA試劑盒提取的DNA測(cè)得的濃度都極低,植物/真菌DNA試劑盒提取的DNA測(cè)得的濃度則遠(yuǎn)高于植物DNA試劑盒提取的DNA。結(jié)合圖一、圖二的電泳結(jié)果可以進(jìn)一步證明植物DNA試劑盒幾乎沒(méi)有提取到肉眼可見的DNA條帶,而植物/真菌DNA試劑盒則成功提取到了DNA。

2. 從圖一、圖二的電泳圖中可以看到植物/真菌DNA試劑盒提取的DNA中有明顯的RNA殘留,這也與測(cè)得的A260/A280比值相符合。一般新鮮樣本提取的DNA殘留有RNA是正常情況,并不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。若是想要徹底去除RNA ,可在水浴環(huán)節(jié)加入5 μl RNase A儲(chǔ)存液(50 mg/mlSimgen Cat. No. 8001001)即可。

3. 從松杉綱植物葉片提取到的DNA濃度都不高,可能是該類植物葉片中含的纖維素比較高所導(dǎo)致。還好植物/真菌DNA試劑盒一次可以提取500 mg植物樣本中的DNA,后續(xù)可以用提高樣本用量的方法來(lái)彌補(bǔ)。

4. 對(duì)于水杉、濕地松、雪松3種植物來(lái)說(shuō),使用植物DNA試劑盒提取的效果不明顯,無(wú)法提到DNA,而使用植物/真菌DNA試劑盒后提取效果明顯,驗(yàn)證了植物/真菌DNA試劑盒確實(shí)能提取松杉綱植物樣本的DNA。

 

植物DNA試劑盒操作步驟簡(jiǎn)單,但面對(duì)有豐富衍生物的特殊植物樣本也有力不從心的時(shí)候。植物/真菌DNA試劑盒雖然操作步驟略微復(fù)雜,但對(duì)于有各種復(fù)雜衍生物的植物、真菌樣本卻都能應(yīng)付,歡迎大家索要試用裝嘗試一下吧。