某天風(fēng)和日麗，我像往常一樣去公司上班，一到辦公室，銷(xiāo)售部的小伙伴就跑來(lái)向我抱怨：“小新啊，最近公司的凝膠回收試劑盒是不是質(zhì)檢不過(guò)關(guān)？我已經(jīng)接到好幾個(gè)投訴電話了?。?！”

我：“你說(shuō)啥！??？？怎么可能，出貨前都檢驗(yàn)了，沒(méi)有問(wèn)題?。。?！”

在小伙伴滿臉懷疑的表情下，我還是果斷的再檢測(cè)了一次，對(duì)比之后拿到了數(shù)據(jù)，分分鐘甩了出來(lái)。

“不是吧？！85%的回收率客戶還嫌低？”

“可是客戶反映只有不到50%啊……”

為了實(shí)力證明產(chǎn)品的質(zhì)量，我決定去客戶的實(shí)驗(yàn)室走一趟。（這么近，不去多不好啊……）一上午時(shí)間搞定，回來(lái)之后小伙伴問(wèn)我怎么樣。為什么我們自己檢測(cè)的數(shù)據(jù)與客戶做出的結(jié)果差距如此之大？下面就由小新為大家解答：凝膠回收過(guò)程中有哪些容易被忽略的要點(diǎn)。

對(duì)照組采用無(wú)損失凝膠回收：（每組實(shí)驗(yàn)均有兩個(gè)重復(fù)）

30μl+120μl凝膠作為樣品，然后通過(guò)正常的凝膠回收實(shí)驗(yàn)操作步驟（參照杭州新景生物試劑凝膠回收試劑盒說(shuō)明書(shū)）。

第一組實(shí)驗(yàn)組：凝膠塊薄厚差異（每組實(shí)驗(yàn)均有兩個(gè)重復(fù)）

客戶制膠相對(duì)較薄，實(shí)驗(yàn)室制得膠比較厚。這會(huì)兒估計(jì)會(huì)有小伙伴說(shuō)了，做那么厚的膠豈不是浪費(fèi)嗎？然而真的是浪費(fèi)嘛？我們來(lái)看圖片

（圖1：薄膠樣為仿客戶制膠）

（圖2：厚膠樣為實(shí)驗(yàn)室制膠）

從圖上我們可以很明顯的看出圖1的凝膠較薄，在跑樣孔附近有凸起，且整塊膠薄厚不均勻，圖2的膠明顯厚度均勻，沒(méi)有明顯的凸起凹陷。

那么為什么薄的膠會(huì)出現(xiàn)不均勻的現(xiàn)象呢？這在物理學(xué)上被稱之為“毛細(xì)作用”（毛細(xì)作用：是由分子表面張力引起的，由表面張力和分子與另一種分子之間的親和力引起的。以上來(lái)自百度百科）。

那么薄厚不同的膠，會(huì)對(duì)最終凝膠回收效率有什么影響呢？

我們?cè)趦蓧K厚薄不同的膠中添加了30μl同樣的DNA樣本，然后通過(guò)正常的凝膠回收實(shí)驗(yàn)操作步驟（參照杭州新景生物試劑凝膠回收試劑盒說(shuō)明書(shū)），得到了最終的一份實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。與此同時(shí)，我們還進(jìn)行了第二組實(shí)驗(yàn)。

第二組實(shí)驗(yàn)：跑膠時(shí)間對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響（每組實(shí)驗(yàn)均有兩個(gè)重復(fù)）

點(diǎn)完樣，稍等片刻，我們?cè)賮?lái)觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

小新跑膠結(jié)束啦，為了效果更明顯，我們需要在側(cè)面觀察側(cè)面觀察DNA在凝膠中的狀態(tài)：

圖3 ：1號(hào)組厚膠電泳15分鐘效果

 圖4：2號(hào)組厚膠電泳30分鐘效果

 圖5：薄膠電泳15分鐘效果

 圖6：3號(hào)組薄膠電泳30分鐘效果

通過(guò)對(duì)比圖3和圖4（或者圖5和圖6），均可看出，隨著電泳時(shí)間的加長(zhǎng)，DNA條帶出現(xiàn)明顯的擴(kuò)散。如果凝膠比較厚，如圖4，大部分DNA還保留于凝膠中，但是相對(duì)較薄的凝膠，如圖6，估計(jì)得有一半的DNA都跑到電泳緩沖液中了。當(dāng)然，直觀感受沒(méi)有依據(jù)那么我們就用數(shù)據(jù)說(shuō)話，接下來(lái)繼續(xù)切膠回收。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：每組實(shí)驗(yàn)均有兩個(gè)重復(fù)（真相終于要浮出水面啦~）

1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)實(shí)驗(yàn)組的平均回收效率分別為：85.8%、61.8%、37%（看看，這就是區(qū)別?。。。?。由此我們可以總結(jié)出：在凝膠回收的過(guò)程中盡量做相對(duì)厚一點(diǎn)的膠（為了回收效率就別在意那么一點(diǎn)點(diǎn)膠啦~），最大可能避免毛細(xì)作用導(dǎo)致膠體不均勻進(jìn)而影響回收效率；此外盡可能不要過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的電泳，不然大部分的DNA都從凝膠膠體里跑到電泳緩沖液中的話，回收率當(dāng)然就低啦！回收過(guò)程中還要將凝膠塊融化完全，以避免堵塞純化柱。當(dāng)然這種小的細(xì)節(jié)相信大家都知道啦。好了今天的小新課堂就到這里了，下期再會(huì)！

杭州新景生物試劑開(kāi)發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室

2016年1月26日