一、材料：

1. 樣品：

由廈門**商貿(mào)有限公司提供。

2. 動(dòng)物組織DNA試劑盒（Simgen，Cat.No.3101050）

4. PCR擴(kuò)增試劑、引物、探針為杭州新景生物試劑開發(fā)有限公司自配或委托上海**生物技術(shù)有限公司合成。

5. PCR儀：ABI PRISM® 7000 Sequence DeteCtion System

6. 離心機(jī)：Thermo Biofuge pico

二、方法：

1. 用Simgen動(dòng)物組織DNA試劑盒分離純化白魚粉中的DNA。

2. 按下列組分配制PCR檢測(cè)試劑( 40 μl反應(yīng)體系)：

Master Mix(2×)              20.0 μl

上游引物FP                1.0 μl

下游引物RP                1.0 μl

探針Probe                  0.5 μl

50× ROX                   0.8μl

ddH₂O                     11.7 μl

向每個(gè)PCR反應(yīng)管中加入35 μl反應(yīng)混合液，再加入5μl分離純化的DNA進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)。

注：陽性對(duì)照用雞DNA作為模板，陰性對(duì)照用ddH₂O作為模板。

3. PCR循環(huán)條件設(shè)置： 95℃ 1min→40×（95℃ 15s→60℃ 30s）

三、結(jié)果判定：

1．有效性原則

陰性對(duì)照：無FAM熒光信號(hào)檢出，未出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線。

陽性對(duì)照：有FAM熒光信號(hào)檢出，并出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線。

結(jié)果：

1. 送檢的樣品未檢測(cè)到雞源DNA組分。

2. 結(jié)果分析：

①　送檢樣品和陰性對(duì)照均未起線，陽性對(duì)照CT值為19.55。

②　注意：本基因檢測(cè)僅能檢測(cè)到雞源DNA組分，不能檢測(cè)到其他鳥類的DNA組分，即樣品中若含有鴨、鵝等DNA組分，也是無法檢測(cè)出的。

Ct值報(bào)告截圖如下：

熒光定量PCR擴(kuò)增曲線截圖如下：