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驢骨組織的驢源性鑒定

作者:新景實(shí)驗(yàn)室
版權(quán)說明:本文系原創(chuàng)文章 轉(zhuǎn)載請標(biāo)注出處和本文鏈接

一、材料:

1. 樣品:送檢腿骨組織客戶提供。

2. 動物組織DNA試劑盒(Simgen,Cat.No.3101050

3. PCR擴(kuò)增試劑、引物、探針為杭州新景生物試劑開發(fā)有限公司自配或委托上海生工生物技術(shù)有限公司合成。

4. PCR儀:ABI PRISM® 7500 Sequence DeteCtion System

5. 離心機(jī):Thermo Biofuge pico

二、方法:

1. Simgen動物組織DNA試劑盒分離純化樣本中的DNA。

2. 按下列組分配制PCR檢測試劑( 40 μl反應(yīng)體系)

Master Mix(2×)              20.0 μl

上游引物FP                1.0 μl

下游引物RP                1.0 μl

探針Probe                  0.5 μl

50× ROX                   0.8μl

ddH2O                     11.7 μl

向每個PCR反應(yīng)管中加入35 μl反應(yīng)混合液,再加入5μl分離純化的DNA進(jìn)行qPCR檢測。

注:陽性對照用實(shí)驗(yàn)室保藏的DNA作為模板陰性對照用ddH2O作為模板。

3. PCR循環(huán)條件設(shè)置: 95℃ 1 min→40×95℃ 15s→60℃ 30s

三、結(jié)果判定:

1.有效性原則

陰性對照:無FAM熒光信號檢出,未出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線。

陽性對照:有FAM熒光信號檢出,并出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線。

以上要求必須同時滿足,否則本次檢測無效。

結(jié)果:

1. 送檢樣本中的腿骨組織DNA通過驢的特異性熒光探針擴(kuò)增檢測呈陽性,判斷檢測腿骨確為驢腿骨

2. 結(jié)果分析:

本次腿骨組織樣本提取了兩管DNA,分別是腿骨上殘留的肌肉組織(編號為donkey 1)和腿骨內(nèi)的骨髓組織(編號為donkey 2),經(jīng)PCR擴(kuò)增均性,Ct分別19.62119.664,陽性對照的Ct值為17.408,陰性對照未起線。

送檢腿骨組織Ct值報告:


送檢腿骨組織DNA樣本的熒光定量PCR擴(kuò)增曲線:


 A:陰性對照 B:donkey1 C:donkey2 D:陽性對照