方法一 大腸桿菌質(zhì)粒DNA的大量提取 (堿法)1.將含有質(zhì)粒的大腸桿菌在LB液體培養(yǎng)基(含適量抗生素)中37℃培養(yǎng)16-20 小時。 2.用含抗生素的LB培養(yǎng)基繁殖大腸桿菌37℃,250rpm,震蕩培養(yǎng)1閱讀全文
1、快速微量提取法1.取1.5ml菌體培養(yǎng)物于一滅菌Ep管中,12000rpm離心1min,丟去上清夜,收集菌體。2.加入400μl裂解液(40mMTris-醋酸,20mM醋酸鈉,1mMEDT閱讀全文
1.0.2-0.5g糞便置于Ep管中(冰水?。尤?mlPBS,漩渦振蕩混勻,200xg離心5min,取上清,冰水浴;2.向沉淀中加入1mlPBS,重復步驟1;3.混合兩次上清,用300g離心5min,閱讀全文
1. 挑取大腸桿菌菌單菌落,培養(yǎng)至穩(wěn)定期,取菌液 2.0 mL 于2.0 mL離心管離心得菌體。2. 每管加入 1 mL Trizol 溶液,蓋緊管蓋,激烈振蕩15 s,室溫靜置5 min 4℃,12000 g,離心 10 min;取上清轉(zhuǎn)閱讀全文
一、水煮模板法——主要用于PCR反應1、 接種單菌落于LB或平板中,連續(xù)劃線,37℃培養(yǎng)18-24小時。2、 刮取1~2接種環(huán)菌苔加入150ul三蒸水中,混勻,100℃煮沸10min。3、 12000轉(zhuǎn)/閱讀全文
一、基因組DNA提取方法1、貼壁細胞用胰酶消化,離心收集。2、細胞重懸于冰冷的PBS漂洗一次,離心收集。試驗步驟2再重新作一邊。3、加入5mlDNA提取緩沖液,(10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,0.5%SDS),混閱讀全文
1.紅細胞裂解液的稀釋:根據(jù)處理血液樣品的體積選取適當體積的10×紅細胞裂解液(例如待處理的血液樣品體積為200μl,則取140μl10×紅細胞裂解液),用RNase-freedd閱讀全文
1、取出細胞、收集上清保存?zhèn)溆?、用冷PBS沖洗細胞兩次3、加入 1ml Trizol (24孔板每孔加0.5ml即可),調(diào)小刻度用移液器吹打細胞至液體澄清(生化:搖動混勻后室溫孵育10min)4、將裂解閱讀全文
1、 取新鮮動物組織0.1-0.2g置于組織勻漿器中,加入預冷的細胞裂解液1買來,在水浴中迅速勻漿15-30s,以充分研碎組織。然后將細胞懸浮液吸入另一試管中。2、 加入2mol醋酸鈉(ph4.0)120μl,充分混閱讀全文
需要準備的試劑氯仿、異丙醇、75%乙醇(用RNase-free水配制)、RNase-free的水1.勻漿處理(Homogenization)直接閱讀全文